1920 x 1200, 232 кБ

batman: arkham origins леди шива шива сандра ву сан- сандра вусан боец ниндзя взгляд перчатки плащ wb games montréal warner bros. interactive entertainment

1923 x 1200, 138 кБ

1600 x 1067, 413 кБ

1920 x 1280, 395 кБ

1920 x 1440, 523 кБ

1920 x 1324, 282 кБ

1680 x 1050, 408 кБ

2700 x 1080, 667 кБ

2188 x 1080, 287 кБ

1920 x 1280, 150 кБ

1920 x 1373, 300 кБ

1920 x 1280, 393 кБ

1920 x 1222, 281 кБ

1920 x 1222, 449 кБ

1920 x 1264, 465 кБ

1920 x 1440, 311 кБ

1920 x 1280, 499 кБ

1920 x 1278, 366 кБ

1920 x 1278, 345 кБ

1920 x 1370, 460 кБ

1920 x 1431, 309 кБ

1920 x 1373, 273 кБ

1953 x 1080, 164 кБ

1920 x 1327, 291 кБ

Ещё картинки

Модные модели (76 фото)

Модели в стильной одежде

Marciano guess новая коллекция

Барбара Палвин 2020

Модельные Наряды

Эмили Дидонато Луки

Candice Swanepoel

Сандра Хеллберг (Sandrah Hellberg)

Фотомодели девушки блондинки

Манго 2015

Барбара Палвин стиль в одежде

Стильная одежда для девушек

Стильная одежда

Balmain 2019

Стильная одежда

Реклама Giuseppe Zanotti

Фотомодель в пиджаке

Модель Томми Хилфигер

Gucci пальто 2013

Фэшн съемка

Модная одежда

Супермодель Джиджи Хадид

Мика Джианелли

Модная женщина

Позы для моделей одежды

Жизель Бюндхен в пальто

Кара Делевинь с мокрыми волосами

Брендовая одежда для девушек

Барбара Палвин стиль лето

Саша Пивоварова в полный рост

Лара диор

Сандра Хеллберг фигура

Кара Делевинь бренды

Элегантная девушка

Fashion модели

Ассортимент женской одежды

Реклама одежды

Красивая одежда

Саша Пивоварова сейчас 2020

Девушка в костюме на улице

Модели одежды

Модель Барбара Фиальо

Сандра Хеллберг фото

Модель Джиджи Хадид

Барбара Палвин 2016

Фотосессия на улице

Стильная одежда для девушек

Вика Фалилеева модель

Модная женская одежда

Кампейн гуччи 1992

Элегантная женщина

Burberry 2000

Модная девушка

Роберто Кавалли с моделями

Вог макиатт

Модная одежда для девушек

Дольче Габбана дом моды в Италии

Современная одежда

Модные женские вещи

Стильные подруги

Стильная девушка в куртке

Красивая одежда

Женщина с сумкой

Фотосессия Джиджи Хадид 2020

Фотомодели модное на белом фото

Городской стиль в одежде

Стильная одежда

Сандра Хеллберг горячие

Костюмы для девушек модные

Стильная одежда для девушек

Стильная одежда для девушек

Anastasia Miranda

Яркий фэшн образ

Стильная фотомодель

Max Mara одежда

Саша Пивоварова в рекламах

Яркая женская одежда

Sandrah Hellberg (178 изображение загружатьs)

178 изображение загружатьs

Sandrah Hellberg

фото по biron14

Sandrah Hellberg

фото по anetta39

Sandrah Hellberg

фото по maybelle2

Sandrah Hellberg

фото по roger43

Sandrah Hellberg

фото по anica-366

Sandrah Hellberg

фото по ced

Sandrah Hellberg

фото по arte191

Sandrah Hellberg

фото по dar_23

Sandrah Hellberg

фото по sabina9

Sandrah Hellberg

фото по woodie2

Sandrah Hellberg

фото по woodrow9

Sandrah Hellberg

фото по lorenzo-25

Sandrah Hellberg

фото по merilyn-5

Sandrah Hellberg

фото по karalee

Sandrah Hellberg

фото по filmore548

Sandrah Hellberg

фото по oralla409

Sandrah Hellberg

фото по calida10

Sandrah Hellberg

фото по gisela-246

Sandrah Hellberg

фото по giordano

Sandrah Hellberg

фото по claudine5

Sandrah Hellberg

фото по morganica

Sandrah Hellberg

фото по eugine_37

Sandrah Hellberg

фото по corny37

Sandrah Hellberg

фото по dina

Sandrah Hellberg

фото по arte191

Sandrah Hellberg

фото по alvin428

Sandrah Hellberg

фото по hilliary

Sandrah Hellberg

фото по vernor-44

Sandrah Hellberg

фото по isiahi31

Sandrah Hellberg

фото по marian41

Sandrah Hellberg

фото по tilly14

Sandrah Hellberg

фото по carmita8

Sandrah Hellberg

фото по emmeline5

Sandrah Hellberg

фото по grant

Sandrah Hellberg

фото по tilly14

Sandrah Hellberg

фото по esra

Sandrah Hellberg

фото по tracee1

Sandrah Hellberg

фото по cristiano

Sandrah Hellberg

фото по betteanne

Sandrah Hellberg

фото по william167

Sandrah Hellberg

фото по ebeneser12

Sandrah Hellberg

фото по ennis3

Sandrah Hellberg

фото по irina6

Sandrah Hellberg

фото по karlen-44

Sandrah Hellberg

фото по vernor-44

Sandrah Hellberg

фото по lynn

Sandrah Hellberg

фото по corine14

Sandrah Hellberg

фото по hastings

Sandrah Hellberg

фото по charil

Sandrah Hellberg

фото по claudina

Sandrah Hellberg

фото по kristo

Sandrah Hellberg

фото по corny37

Рекламная кампания Guess Accessories

{«items»:[«5fd1a5dd0e8f5f0017db23ac»,»5fd1a5dd0e8f5f0017db23ab»,»5fd1a5dd0e8f5f0017db23aa»,»5fd717e557158200173061e6″,»5fd717e557158200173061e5″,»5fd717e557158200173061e7″],»styles»:{«galleryType»:»Columns»,»groupSize»:1,»showArrows»:true,»cubeImages»:true,»cubeType»:»max»,»cubeRatio»:1. 7777777777777777,»isVertical»:true,»gallerySize»:30,»collageAmount»:0,»collageDensity»:0,»groupTypes»:»1″,»oneRow»:false,»imageMargin»:5,»galleryMargin»:0,»scatter»:0,»rotatingScatter»:»»,»chooseBestGroup»:true,»smartCrop»:false,»hasThumbnails»:false,»enableScroll»:true,»isGrid»:true,»isSlider»:false,»isColumns»:false,»isSlideshow»:false,»cropOnlyFill»:false,»fixedColumns»:0,»enableInfiniteScroll»:true,»isRTL»:false,»minItemSize»:50,»rotatingGroupTypes»:»»,»rotatingCropRatios»:»»,»columnWidths»:»»,»gallerySliderImageRatio»:1.7777777777777777,»numberOfImagesPerRow»:3,»numberOfImagesPerCol»:1,»groupsPerStrip»:0,»borderRadius»:0,»boxShadow»:0,»gridStyle»:0,»mobilePanorama»:false,»placeGroupsLtr»:true,»viewMode»:»preview»,»thumbnailSpacings»:4,»galleryThumbnailsAlignment»:»bottom»,»isMasonry»:false,»isAutoSlideshow»:false,»slideshowLoop»:false,»autoSlideshowInterval»:4,»bottomInfoHeight»:0,»titlePlacement»:[«SHOW_ON_THE_RIGHT»,»SHOW_BELOW»],»galleryTextAlign»:»center»,»scrollSnap»:false,»itemClick»:»nothing»,»fullscreen»:true,»videoPlay»:»hover»,»scrollAnimation»:»NO_EFFECT»,»slideAnimation»:»SCROLL»,»scrollDirection»:0,»scrollDuration»:400,»overlayAnimation»:»FADE_IN»,»arrowsPosition»:0,»arrowsSize»:23,»watermarkOpacity»:40,»watermarkSize»:40,»useWatermark»:true,»watermarkDock»:{«top»:»auto»,»left»:»auto»,»right»:0,»bottom»:0,»transform»:»translate3d(0,0,0)»},»loadMoreAmount»:»all»,»defaultShowInfoExpand»:1,»allowLinkExpand»:true,»expandInfoPosition»:0,»allowFullscreenExpand»:true,»fullscreenLoop»:false,»galleryAlignExpand»:»left»,»addToCartBorderWidth»:1,»addToCartButtonText»:»»,»slideshowInfoSize»:200,»playButtonForAutoSlideShow»:false,»allowSlideshowCounter»:false,»hoveringBehaviour»:»NEVER_SHOW»,»thumbnailSize»:120,»magicLayoutSeed»:1,»imageHoverAnimation»:»NO_EFFECT»,»imagePlacementAnimation»:»NO_EFFECT»,»calculateTextBoxWidthMode»:»PERCENT»,»textBoxHeight»:26,»textBoxWidth»:200,»textBoxWidthPercent»:65,»textImageSpace»:10,»textBoxBorderRadius»:0,»textBoxBorderWidth»:0,»loadMoreButtonText»:»»,»loadMoreButtonBorderWidth»:1,»loadMoreButtonBorderRadius»:0,»imageInfoType»:»ATTACHED_BACKGROUND»,»itemBorderWidth»:0,»itemBorderRadius»:0,»itemEnableShadow»:false,»itemShadowBlur»:20,»itemShadowDirection»:135,»itemShadowSize»:10,»imageLoadingMode»:»BLUR»,»expandAnimation»:»NO_EFFECT»,»imageQuality»:90,»usmToggle»:false,»usm_a»:0,»usm_r»:0,»usm_t»:0,»videoSound»:false,»videoSpeed»:»1″,»videoLoop»:true,»jsonStyleParams»:»»,»gallerySizeType»:»px»,»gallerySizePx»:1000,»allowTitle»:true,»allowContextMenu»:true,»textsHorizontalPadding»:-30,»itemBorderColor»:{«themeName»:»color_12″,»value»:»rgba(239,239,239,0)»},»showVideoPlayButton»:true,»galleryLayout»:2,»calculateTextBoxHeightMode»:»MANUAL»,»targetItemSize»:1000,»selectedLayout»:»2|bottom|1|max|true|0|true»,»layoutsVersion»:2,»selectedLayoutV2″:2,»isSlideshowFont»:true,»externalInfoHeight»:26,»externalInfoWidth»:0. 65},»container»:{«width»:220,»galleryWidth»:225,»galleryHeight»:0,»scrollBase»:0,»height»:null}}

Фото модель — топ модель фото, фото моделей девушек – ФотоКто

Мы отобрали самых горячих супермоделей за 2013 год и подготовили эту подборку, чтобы Вы насладились просмотром фотографий удивительно красивых девушек.

Конечно, у Вас может быть свое мнение о том, как должен выглядеть этот рейтинг. Но нет сомнений в том, что в него вошли по-настоящему сногсшибательные красавицы. Приятнейшего просмотра!

25. Арманда Бартен (Armanda Barten)

25. Арманда Бартен (Armanda Barten)

Если Вы относитесь к числу тех людей, которые испытывают слабость к голландским супермоделям, то потрясающая блондинка Арманда Бартен из Нидерландов не могла ускользнуть от Вашего внимания. Так и хочется посетить Амстердам, откуда родом эта красавица. Она стала новым лицом линии нижнего белья Femilet, в котором выглядит безупречно.

24. Елена Сантарелли (Elena Santarelli)

24.  Елена Сантарелли (Elena Santarelli)

Возможно, Вы впервые слышите об этой суперкрасавице. Это означает, что Вы родом не из Италии, где она чрезвычайно популярна, как супермодель и телеведущая. Елена лишь однажды блистала у нас на сайте, но это была исключительная фотосессия, снимки из которой получились великолепные. У этой итальянской модели есть особая примета — кокетливая татуировка на правом плечике.

23. Кэролайн Коринф (Caroline Corinth)

23. Кэролайн Коринф (Caroline Corinth)

Кэролайн это свежее лицо от Victoria’s Secret. Она родом из Дании и такая же милая, как и Эрин Хизертон, а это о многом говорит. У нее безупречное тело и эта девушка в нижнем белье и в купальниках выглядит потрясающе. Мы надеемся, что она продолжит сотрудничать с VS и еще не раз порадует нас новыми фотосетами.

22. Нерея Арс (Nerea Arce)

22. Нерея Арс (Nerea Arce)

Нерея относится к тем девушкам, которые вызывают любовь с первого взгляда. Ее гипнотизирующая красота никого не оставляет равнодушным. Эта супермодель из Испании удивительно хороша в сексуальных бикини, но нет сомнений в том, что она невероятно привлекательно выглядит даже в самых обыкновенных нарядах.

21. Анна-Мария Соболевска (Anna Maria Sobolewska)

20. Марина Моззони (Marina Mozzoni)

Еще одна сексуальная латиноамериканка из Аргентины, которая выглядит совершенно удивительно, когда позирует в изящном нижнем белье. Эта девушка стала новым лицом линейки нижнего белья от Simone Perele. От каждого снимка Марины Моззони захватывает дух.

19. Сандра Хеллберг (Sandrah Hellberg)

19. Сандра Хеллберг (Sandrah Hellberg)

Наверняка, многие из Вас узнали супермодель Сандру Хеллберг, так как эта красавица позировала для Guess и других известных брендов. Мы несказанно рады открытию этой шведской красавицы и с нетерпением ожидаем появления ее новых фотографий.

18. Джулия Перейра (Julia Pereira)

18. Джулия Перейра (Julia Pereira)

Мы уже не раз отмечали, что многие девушки, которые входят в число самых горячих супермоделей, родом из Бразилии. Джулия Перейра как раз одна из пяти новых бразильских моделей, которые отличаются исключительной красотой.

17. Лара Альварес (Lara Alvarez)

17. Лара Альварес (Lara Alvarez)

Это еще одна девушка, которая всего один раз появилась у нас на сайте в прошедшем году, но ее снимки оставили самое неизгладимое впечатление. Лара Альварес хорошо известна в Испании, как телеведущая. И, судя по фотографиям, она великолепная модель. В нижнем белье эта девушка неотразима.

16. Оливия Гарсон (Olivia Garson)

16. Оливия Гарсон (Olivia Garson)

Оливия Гарсон готова потеснить красавицу Кэндис Свейнпол. Это новая модель из Южной Африки, которая стремительно завоевывает популярность в мире моды. Она также потрясающе выглядит в купальных костюмах. Глядеть на ее фотографии это истинное удовольствие.

15. Рэйчел Мортенсон (Rachel Mortenson)

15. Рэйчел Мортенсон (Rachel Mortenson)

Торговая марка Frederick’s of Hollywood отличается безупречным вкусом, когда речь заходит о подборе моделей. И Рэйчел Мортенсон яркое тому подтверждение. Мы никогда ранее не слышали об этой супермодели из США, пока она не стала рекламировать коллекцию нижнего белья от FOH. К счастью, она уже снялась в нескольких фотосессиях для этой торговой марки.

14. Дебора Мейс (Deborah Mace)

14. Дебора Мейс (Deborah Mace)

Это еще одна очаровательная модель с блестящим будущим. Дебора Мейс родом из Франции. Она не отличается пышными формами, как многие другие супермодели, но у нее потрясающая улыбка, которая добавит Вам солнечного настроения.

13. Илиана Папагеоргиу (Iliana Papageorgiou)

13. Илиана Папагеоргиу (Iliana Papageorgiou)

Наш рейтинг самых горячих девушек не может обойтись без греческой богини, о существовании которой мы узнали в 2013 году. Ее зовут Илиана Папагеоргиу. Глаза, губы и соблазнительные формы этой девушки выглядят божественно. К сожалению, мы видели лишь одну фотосессию с этой суперкрасавицей, но надеемся, что в следующем году нас ждут новые снимки с Илианой.

12. Ольга Рзеплинска (Olga Rzeplinska)

12. Ольга Рзеплинска (Olga Rzeplinska)

Польские супермодели заслуженно завоевали всеобщую любовь. Ольга Рзеплинска это еще один образец девушки удивительной красоты из Польши. Ее фамилию сложно запомнить, но внешность у этой блондинки незабываемая.

11. Вероника Ассис (Veronica Assis)

11. Вероника Ассис (Veronica Assis)

Чем ближе мы подбираемся к первому месту, тем сложнее нам приходится.  Совершенство по имени Вероника Ассис восхищает своей потрясающей внешностью. Она невероятно очаровательная и сексуальная. Наслаждайтесь!

10. Сандра Кубика (Sandra Kubicka)

10. Сандра Кубика (Sandra Kubicka)

Голубоглазая Сандра Кубика невероятно милая и сладкая красавица, ставшая очередным открытием в модельном бизнесе. Ее можно сравнить с Барбарой Палвин и Ниной Агдал. Сандра удивительная девятнадцатилетняя модель из Польши, о которой мы еще не раз услышим в ближайшие годы.

9. Луиза Фрейеслебен (Luiza Freyesleben)

9.  Луиза Фрейеслебен (Luiza Freyesleben)

Мы не станем долго расписывать красоту Луизы Фрейеслебен. Всего за несколько месяцев мы трижды публиковали снимки из разных фотосессий этой бразильской супермодели. На самом деле она потрясающая красавица. Непременно посмотрите ее фото у нас на сайте, если Вы их еще не видели.

8. Мария Виноградова (Mariya Vinogradova)

8. Мария Виноградова (Mariya Vinogradova)

Вам нравится Ирина Шейк? Появилась новая русская супермодель, которая выглядит так же великолепно. Мария Виноградова очень близка к определению совершенства. Она бы оказалась еще выше в этом рейтинге, если бы у нас было больше ее снимков. Мы лишь один раз публиковали фотографии с Марией, и от них буквально захватывает дух.

7. Саманта Градовилль (Samantha Gradoville)

7. Саманта Градовилль (Samantha Gradoville)

Имя Саманты Градовилль уже очень хорошо известно в мире модельного бизнеса. Многие знаменитые дизайнеры хотят работать с этой невероятной девушкой. Удивительно чувственная супермодель с идеальным телом родом из США. Она великолепна на всех фотографиях, которые мы видели.

6. Натали Моррис (Natalie Morris)

6. Натали Моррис (Natalie Morris)

Это еще одна прекрасная девушка из США. Натали Моррис счастливая обладательница прекрасного тела. Можно лишиться дара речи, глядя как она позирует в соблазнительном нижнем белье.

5. Даниэла Брага (Daniela Braga)

5. Даниэла Брага (Daniela Braga)

Имя этой бразильской красавицы Вам обязательно запомнится, так как в ближайшие годы она непременно будет мелькать у нас на сайте. Первыми ее обнаружили агенты из Victoria’s Secret и она сразу же стала демонстрировать белье этого популярного бренда. Эта девушка настолько удивительная, сексуальная и милая, что в нее можно влюбиться с первого взгляда.

4. Danielly Silva

2. Тиффани Келлер (Tiffany Keller)

Эта девушка обошла всех других красавиц из США. Тиффани Келлер одна из красивейших современных супермоделей на планете. Она потрясающе выглядит в нижнем белье, в купальниках и в любой другой одежде. Особенно хороша эта модель в образе сексуальной невесты.

1. Алехандра Алонсо (Alejandra Alonso)

1. Алехандра Алонсо (Alejandra Alonso)

Из всего обилия удивительно красивых девушек мы отдали первое место именно этой сногсшибательной супермодели из Испании. Она настолько чувственная и сладкая, что любой парень мог бы сподвигнуться на изучение испанского языка, чтобы написать ей любовное письмо.

^{Источник:http://cameralabs.org/}

Идеи подарков на Новый Год от Guess. Праздничная коллекция аксессуаров 2012

Близится любимый всеми праздник — Новый год и приходит время подумать о приобретении подарков своим близким, подругам, да и себя побаловать не помешало бы! Сегодня я хотела бы поделиться с вами стильными аксессуарами из праздничной коллекции 2012 от бренда Guess, которые представляют собой отличное решение идеи подарков на Новый Год.

На этот раз бренд демонстрирует великолепный и красочный lookbook, наполненный солнечными  изображениями, где fashion модель Сандра Хеллберг (Sandrah Hellberg), появляется в восхитительных купальниках в дуэте со стильными и шикарными сумками и роскошной элегантной обувью.

Пара фотографов, работавших над созданием lookbook’a —  Claudia и Ralf Pulmanns полностью воплотили отличные идеи подарков на Новый Год от бренда Guess, передав красочную атмосферу и желание стать частью данной красоты.

Стилистом выступила Martina Nilsson, придавшая еще больше чувственности Сандре Хеллберг и проработавшая концепцию фотосъемки. Прическами занимался Peter Savic, создавший восхитительный объем и наполненные движением локоны, а макияжем — Devra Kinery, которая подчеркнула природную красоту модели.

границ | Прогестерон подавляет иммунные реакции в активированных in vitro CD4 + Т-клетках и влияет на гены, связанные с аутоиммунными заболеваниями, которые улучшаются во время беременности

Введение

Беременность представляет собой уникальное иммунологическое состояние, поскольку иммунная система матери способна переносить присутствие полуаллогенного плода . Считается, что эта иммунологическая толерантность возникает из-за обширных иммунных и эндокринных изменений, вызванных во время беременности (1, 2), которые контролируются повышенными уровнями стероидных гормонов, таких как прогестерон (P4), которые необходимы для установления и поддержания беременности (3– 5).Соответственно, низкие уровни P4 были связаны с несколькими осложнениями беременности (6-8), а лечение антагонистом P4-рецепторов мифепристоном (RU486) приводит к прерыванию беременности (9), что еще раз подтверждает важность P4 во время беременности. Интересно, что терапевтическое использование P4 во время беременности снижает риск преждевременных родов в определенных группах риска (10), что подчеркивает потенциальное использование P4 в качестве лечения осложнений беременности.

Роль P4 в основном связана с его влиянием на гомеостаз и ремоделирование миометрия (11).Однако на важную иммуномодулирующую роль P4 in vivo указывает улучшение, связанное с беременностью, и последующее ухудшение аутоиммунных заболеваний, таких как рассеянный склероз (РС) и ревматоидный артрит (РА), которые совпадают с временными точками во время беременности. и после беременности, когда уровень P4 самый высокий и самый низкий, соответственно (12–14). Кроме того, наблюдались различия в иммунных ответах, связанных с высоким и низким уровнями P4 во время менструального цикла (15, 16).Предыдущие исследования иммунно-эндокринных взаимодействий в значительной степени были сосредоточены на том, как эстроген влияет на иммунную систему. Интересно, что уровни эстрогена увеличиваются и уменьшаются во время беременности так же, как P4, хотя эстроген, по-видимому, обладает как иммунорегулирующими, так и иммуноактивирующими свойствами (17). Действительно, эстроген был предложен в качестве основного фактора, объясняющего учащение аутоиммунных заболеваний у женщин (18). С другой стороны, in vitro эффекты P4 на разные популяции иммунных клеток подтверждают ключевую роль P4 в регуляции иммунных ответов, которые могут быть центральными для обеспечения толерантности плода (19-24).Более того, роль P4 как мощного иммуносупрессора подтверждается исследованиями in vivo , показывающими участие P4 в ответ на аллогенную и ксеногенную трансплантацию (25–27) и отторжение трансплантата у людей (28).

CD4 ⁺ Т-клетки являются центральными в иммунной системе, выступая в качестве главных регуляторов иммунитета и толерантности (29). Важность CD4 ⁺ Т-клеток во время беременности очевидна по их относительному исключению из взаимодействия плода и матери, чтобы ограничить потенциально вредную активацию (30), тогда как регуляторные Т-клетки обогащены, тем самым еще больше ограничивая вредные Т-клеточные ответы (31 , 32).Параллельно ограничение активации Т-клеток CD4 ⁺ является важным аспектом при заболеваниях, опосредованных Т-клетками, поскольку аберрантная активация аутореактивных Т-клеток CD4 ⁺ является центральным механизмом в патогенезе заболевания (33). Таким образом, регуляция Т-клеток CD4 ⁺ является общим знаменателем, который может предотвращать нежелательные материнские иммунные ответы на плод, а также объяснять улучшение аутоиммунных заболеваний во время беременности. Интересно, что P4, как было показано, ограничивает активацию Т-клеток CD4 ⁺ (34–36). Однако углубленный анализ точного воздействия P4 на активацию Т-клеток CD4 ⁺ человека и его потенциального участия в модуляции заболевания во время беременности все еще отсутствует.

Здесь мы сообщаем подробные данные секвенирования РНК, демонстрирующие глубокое прямое влияние P4 на активацию Т-клеток. Более конкретно, большие P4-индуцированные транскриптомные изменения были наиболее заметно подавляющими для иммуно-ассоциированных генов и путей, в то время как P4 активировал в основном неиммунные гены.Интересно, что эти иммунные гены, подавляемые P4, были значительно обогащены генами, связанными с заболеваниями, которые, как известно, модулируются во время беременности, включая MS и RA. Эффекты на несколько из этих связанных с заболеванием генов были дополнительно подтверждены на уровне белка с использованием анализа расширения близости. Наши результаты подтверждают, что P4 является основным иммунорегулирующим гормоном во время беременности, и предполагают, что P4 может участвовать в улучшении некоторых аутоиммунных заболеваний, вызванных беременностью, тем самым представляя потенциальную возможность для будущих вариантов лечения.

Материалы и методы

Объекты исследования

Образцы крови были взяты у тринадцати здоровых женщин-добровольцев (средний возраст 32 года, 25-43 года), набранных среди студентов и персонала Университета Линчёпинга и больницы Университета Линчёпинга, Швеция. Информированное согласие было получено до сбора образцов, и исследование было одобрено Региональным советом по этике в Линчёпинге (Regionala etikprövningsnämnden i Linköping), Швеция (номер одобрения: M39-08). На момент включения ни одна из женщин не использовала гормональные контрацептивы или какие-либо другие лекарства.Моменты сбора образцов были равномерно распределены по менструальному циклу (предполагая, что менструальный цикл длился 28 дней; семь женщин находились в лютеиновой фазе и шесть — в фолликулярной фазе). Не было различий в ответе на P4 (на основе кратного снижения экспрессии CD69 у женщин в лютеиновой и фолликулярной фазах (данные не показаны). выделены градиентным центрифугированием с использованием Lymphoprep ™ (Axis-Shield, Осло, Норвегия) и трижды промыты в сбалансированном солевом растворе Хэнка (Life Technologies, Дармштадт, Германия).Магнитно-активированная сортировка клеток (MACS) была использована для выделения CD4 ⁺ Т-клеток. PBMC ресуспендировали в буфере MACS (фосфатно-солевой буфер, PBS; Medicago, Упсала, Швеция) с добавлением 2 мМ ЭДТА (Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) и 0,5% фетальной бычьей сыворотки (FBS; Cytivia (ранее GE Healthcare Life). Sciences) HyClone ™, Уппсала, Швеция) и клетки CD4 ⁺ выделяли с помощью положительной иммуномагнитной селекции с использованием колонок MS и сепаратора miniMACS (Miltenyi Biotec, Bergish Gladbach, Германия) в соответствии с инструкциями, предоставленными производителем.Чистоту выделенных CD4 ⁺ Т-клеток оценивали с помощью проточной цитометрии (средняя чистота 98,5%, диапазон 97,6-99,0%).

Предварительная инкубация с прогестероном

Выделенные CD4 ⁺ Т-клетки предварительно инкубировали с 10, 30 и 50 мкМ P4 (водорастворимый; Sigma Aldrich) или без него (только среда для культивирования клеток). Клетки высевали в 24-луночные планшеты с плоским дном (Costar ™; Corning Inc, Корнинг, Нью-Йорк, США) при 1,0 × 10 ⁶ клеток / мл, в конечном объеме 1 мл / лунку среды Дульбекко, модифицированной Isocove (IMDM ; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) с добавлением L-глутамина (292 мг / л; Sigma-Aldrich), незаменимых аминокислот MEM 100X (10 мл / л; Gibco ^® ), пенициллина (50 IE / мл ), стрептомицин (50 мкг / мл; Cambrex-Lonza, Базель, Швейцария) и бикарбонат натрия (3.024 г / л; Sigma-Aldrich) и 5% FBS и инкубировали при 37 ° C и 5% CO ₂ . Через 20 часов клетки удаляли с планшетов, центрифугировали и ресуспендировали в среде для культивирования клеток перед стимуляцией in vitro . См. Рисунок 1A для обзора экспериментального дизайна исследования.

Рисунок 1 Прогестерон подавляет активацию Т-клеток и индуцирует транскриптомные изменения в активированных Т-клетках CD4 ⁺ . (A) Первичные CD4 человека ⁺ Т-клетки были выделены от здоровых небеременных женщин (n = 13) и предварительно инкубированы с или без различных концентраций (10, 30 и 50 мкМ) P4 в течение 20 часов, а затем культивированные неактивированные или активированные in vitro со связанными с планшетом анти-CD3 и анти-CD28 антителами в присутствии или в отсутствие P4 в течение 6-24-72 часов.Образцы, культивированные в течение 72 часов, использовали только для измерения секретируемых белков. Влияние Р4 на активацию Т-клеток оценивали с помощью проточной цитометрии, секвенирования РНК и анализа близости секретируемых белков в супернатантах культур. (B – D) Влияние P4 на маркеры активации Т-клеток CD69 (6 и 24 часа) и CD25 (только 24 часа) анализировали с помощью проточной цитометрии (n = 11-13). Гистограммы показывают процентное содержание Т-клеток CD4 ⁺ , экспрессирующих маркеры активации Т-клеток. Показано среднее ± стандартное отклонение.* p ≤ 0,05, ** p ≤ 0,01, *** p ≤ 0,001, **** p ≤ 0,0001. (E, F) Анализ многомерного масштабирования данных экспрессии генов, полученных с помощью секвенирования РНК (n = 3 неактивированных, n = 8 активированных с 50 мкМ P4 и без них). Группы выделяются цветом фона только для схематических целей. (G, H) Volcano графики транскриптомного анализа дифференциально экспрессируемых генов в CD4 ⁺ T-клетках, активированных в присутствии P4 по сравнению с отсутствием P4. Черные точки FDR ≤ 0.05. P4, прогестерон.

Двадцать четыре луночные планшеты с плоским дном покрывали 0,1 мкг / мл низкоэндотоксиновых анти-CD3 и анти-CD28 антител ( clone UCHT1, клон YTH913.12; Bio-Rad AbD Serotec Limited, Hercules, CA, USA) или только PBS в течение 20 часов при 4 ° C с последующей трехкратной промывкой в ​​PBS. Концентрация антител была выбрана на основании экспериментов по титрованию, где 0.1 мкг / мл приводил к умеренно повышенной экспрессии на клеточной поверхности маркера ранней активации Т-клеток CD69. Т-клетки CD4 ⁺ , предварительно инкубированные без P4, культивировали неактивированными или активированными (с антителами против CD3 / CD28), тогда как Т-клетки CD4 ⁺ , предварительно инкубированные с P4, были активированы в присутствии тех же концентраций, что и во время предварительной инкубации в течение 6-24-72 часов и последующей обработки для проточной цитометрии, экстракции РНК или измерения секретируемых белков. Клетки, культивированные в течение 72 часов, использовали только для измерения белка.Вкратце, после культивирования супернатанты собирали и замораживали при -70 ° C. Часть клеток использовали для анализа проточной цитометрии, а остальные лизировали и гомогенизировали в буфере RLT Plus (Qiagen; Hilden, Германия) с добавлением 143 мМ β-меркаптоэтанола (Sigma Aldrich) и гомогенизировали с помощью шприца и иглы в соответствии с инструкции, предоставленные производителем. Перед экстракцией лизаты хранили при -70 ° C. Жизнеспособность клеток после культивирования составила 87,6% ± 2,7 (среднее ± стандартное отклонение (SD)) через 6 часов 83.1% ± 3,7 через 24 часа.

Оценка статуса активации с помощью проточной цитометрии

Т-клетки CD4 ⁺ ресуспендировали в фиксируемом пятне мертвых клеток LIVE / DEAD ™ (Invitrogen), разведенном 1: 500 в PBS + 0,1% FBS и окрашенном мышиным антителом против человека. CD4-FITC (клон SK3), CD69-APCCy7 (клон FN50), CD25-PE (клон 2A3) и CD3-APC (клон SK7; все от BD Biosciences, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США). Клетки инкубировали в темноте в течение 15 минут при комнатной температуре и промывали PBS + 0,1% FBS перед анализом проточной цитометрии.Десять тысяч CD4 ⁺ Т-клеток были собраны и проанализированы с использованием FACS Canto II (BD Biosciences) и версии 2.1 программного обеспечения Kaluza (Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США). Клетки были заблокированы в соответствии с прямым (FSC) и боковым рассеянием (SSC) и далее определены как CD3 ⁺ CD4 ⁺ (фигура S1). Пороговое значение для экспрессии CD69 было основано на его экспрессии в неактивированных CD4 ⁺ Т-клетках, а экспрессия CD25 была установлена ​​на основе контура идентифицированных отрицательных и положительных популяций.Кратное изменение экспрессии CD69 и CD25 рассчитывали на основании экспрессии маркеров активации на клетках, активированных без P4 (клетки, активированные экспрессией, с P4 / клетки, активированные экспрессией, без P4). Все данные были проанализированы с помощью GraphPad Prism версии 8.0.1 (Сан-Диего, Калифорния, США). Большая часть данных была нормально распределена и поэтому анализировалась с использованием одностороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Даннета. Данные выражены как среднее значение и стандартное отклонение. Статистически значимыми считались значения P ≤ 0,05.

Секвенирование РНК

РНК экстрагировали с использованием набора AllPrep DNA / RNA Mini (Qiagen) в соответствии с протоколом, предоставленным производителем, и РНК элюировали 30 мкл воды, свободной от РНКазы. Концентрацию РНК определяли с помощью спектрофотометра Nanodrop ^® ND-1000 (Nanodrop Technologies Inc; Уилмингтон, Делавэр, США). Качество РНК контролировали с помощью набора Agilent RNA 6000 Nano Kit (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США) на приборе Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies).Числа целостности РНК (RIN) составляли 9,5 ± 0,4 (среднее ± стандартное отклонение). Библиотеки были сконструированы с использованием мРНК TruSeq Stranded (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США), которые были адаптированы для работы на роботе Agilent BRAVO (Agilent Technologies) с 440 нг мРНК в качестве исходного материала на образец. Вкратце, мРНК, содержащую поли-А, выделяли с использованием шариков, покрытых поли-dT, и разбивали на фрагменты из 150-400 пар оснований путем химической фрагментации и превращали в кДНК с помощью обратной транскриптазы и случайного праймера. Ферменты и более короткие фрагменты удаляли с использованием гранул AMPure XP (Beckman Coulter, Индианаполис, Индиана, США).Остальные фрагменты аденилировали с последующим лигированием индекс-адаптеров и амплифицировали с помощью ПЦР. Образцы кодировали штрих-кодом, объединяли и секвенировали на платформе Illumina NovaSeq 6000 с проточной ячейкой S1 и секвенировали PE2x101 bp. В среднем 48,9 миллиона считываний было получено на образец (48,9 × 10 ⁶ ± 10,5 × 10 ⁶ , среднее значение ± стандартное отклонение). Файлы базовых вызовов за цикл были демультиплексированы и преобразованы в FASTQ с использованием bcl2fastq v2.19.1.403 из программного пакета CASAVA (Illumina). Подготовка библиотеки и секвенирование проводились в Национальной инфраструктуре геномики, лаборатории науки для жизни, Стокгольм.Парные образцы от в общей сложности восьми человек (всего n = 38 образцов) были использованы для секвенирования РНК (RNA-seq).

Анализ данных секвенирования РНК

Файлы FASTQ были обработаны с помощью TrimGalore! для удаления загрязнений адаптера и обрезки некачественных участков. Считывания с парных концов были сопоставлены и сопоставлены с ансамблем эталонного генома человека GRCh47 (Genome Reference Consortium Human Build 37) с использованием STAR (версия 2.5.3.a) (37). Счетчики чтения генов были получены с помощью StringTie (версия 1.3.3) (38). Обработку данных проводили в R Studio (R version 4.0; Бостон, Массачусетс, США) с использованием пакетов edgeR (39, 40) и limma (41, 42). Картированные чтения были отфильтрованы для генов с низкой экспрессией (сохранялись гены с количеством на миллион> 1 по крайней мере в 3-х повторах) и использованы для дальнейшего анализа. Количество отфильтрованных генов нормализовали с использованием усеченного среднего значения M через calcNormFactors в edgeR. Преобразование Voom применяли до анализа дифференциальной экспрессии. Коэффициент ложного открытия (FDR; Бенджамини-Хохберг) 0.05 использовали в качестве порога для дифференциально экспрессируемых генов (DEG). Дифференциальную экспрессию, индуцированную P4, рассчитывали, сравнивая CD4 ⁺ Т-клетки, активированные в присутствии или в отсутствие P4 и называемые генами ответа P4.

Путь, анализ обогащения набора генов и перекрытие генов

Для изучения биологической значимости DEGs, анализ обогащения набора генов (GSE) с использованием gseKEGG и анализ пути с использованием enrichKEGG от clusterProfiler (43) на основе Киотская энциклопедия генов и геномов (KEGG) (44, 45).Для анализа GSE в качестве входных данных использовался предварительно ранжированный список DEG с P4-ответом (на основе logFoldChange (logFC), n = 3339 генов через 6 часов и n = 3725 генов), при этом гены, у которых отсутствовал идентификатор гена Entrez. были удалены перед анализом. Оценка обогащения (ES) была рассчитана для всех наборов генов и нормализована для размера набора генов (нормализованная оценка обогащения; NES) по среднему распределению 1000 пермутаций. Минимальный размер набора генов был установлен на 20, а максимальный — на 200 генов, тем самым исключая малые и очень большие наборы общих данных.Скорректированное значение p ≤ 0,05 (по Бенджамини-Хохбергу) считалось статистически значимым. Перекрытие генов между различными наборами генов было рассчитано с использованием пакета GeneOverlap в R (46).

Измерение секретируемых белков в супернатантах культур с использованием анализа Proximity Extension

Чтобы проверить центральные транскриптомные изменения на уровне белка, супернатанты культур, собранные через 6, 24 и 72 часа, анализировали на 92 белка, связанных с воспалением (панель Olink воспаления; https: // www.olink.com/products/inflampting/) с мультиплексным анализом расширения близости (PEA) в центре клинических биомаркеров, Лаборатория науки для жизни, Университет Упсалы, SE-751 85 Uppsala. Вкратце, 1 мкл клеточного супернатанта инкубировали с подобранными парами антител, связанных с уникальными олигонуклеотидами (бесконтактными зондами), специфичными для каждого биомаркера, подлежащего измерению. Близкое расположение зондов, связанных с их мишенями, приводит к гибридизации, которая с добавлением ДНК-полимеразы удлиняет олигонуклеотиды, создавая ДНК-ампликон, который можно обнаружить и количественно оценить с помощью количественной ПЦР в реальном времени (47).Четыре внутренних контроля были включены для контроля качества и для нормализации данных. Данные выражали в виде нормализованной экспрессии белка (NPX), произвольной единицы в логарифмической шкале ₂ . Значениям ниже предела обнаружения была присвоена половина значения предела обнаружения. Белки, которые были обнаружены как минимум в 50% образцов в каждый момент времени, были включены в статистический анализ со следующими исключениями: CCL20 (40% обнаруживается через 24 часа), трансформирующий фактор роста (TGF) -β1 (40% обнаруживается через 24 часа). 72 часа) и фактор ингибирования лейкемии (LIF; 47% через 24 часа), где более половины образцов в группе только активации было обнаружено (8-10 из 10) и значительно выше, чем неактивированные образцы.Статистические различия были определены с использованием теста Фридмана и Бенджамини-Хохберга для корректировки множественных сравнений. Скорректированное значение p ≤0,05 считалось статистически значимым. Все данные были проанализированы с помощью GraphPad Prism версии 8.0.1.

Обогащенный анализ генов, ассоциированных с заболеванием

Гены, ассоциированные с заболеванием, для Хашимото (n = 141), болезни Грейвса (n = 245), MS (n = 801), псориаза (n = 580), RA (n = 1273), системная красная волчанка (СКВ; n = 817) и системный склероз (SS; n = 400) были получены из DisGeNET (48).Все гены болезни, которые не присутствовали в фоновом режиме (все гены, обнаруженные с помощью RNA-seq, n = 14363), были исключены из последующего анализа. Обогащенный анализ генов, связанных с заболеванием, среди генов, затронутых P4, был выполнен с использованием точного теста Фишера для вычисления значений p и отношения шансов для перекрытий. Гены ответа P4, которые использовались, включали уникально экспрессируемые гены, сочетающие DEG как через 6, так и через 24 часа (всего n = 2563 гена с пониженной регуляцией и n = 2403 гена с повышенной регуляцией).

Взаимодействия фактора транскрипции с мишенью

Взаимодействия фактора транскрипции (TF) с мишенью были получены с использованием TRRUST (49) и DoRothEA (50).Общее количество взаимодействий из TRRUST составило 9396 и 6620 из DoRothEA (включая взаимодействия с оценкой достоверности A и B), но ограничение взаимодействий TF, на которые значительно повлиял P4, привело к общему количеству 3124 взаимодействий. Мы использовали TF, на которые значительно влиял P4, а затем включили только те взаимодействия TF-мишени, где мишень также значительно подавлялась P4 и ассоциировалась с заболеванием, как установлено общими генами для всех заболеваний или между MS, псориазом и RA.Обогащение мишеней для STAT1 и STAT3 вычислялось с использованием точного теста Фишера, где мишени среди связанных с заболеванием генов, которые были подавлены P4, сравнивались с мишенями соответствующих TF среди всех генов, подавляемых P4. Для анализа TF-мРНК-белка мы объединили дифференциально экспрессируемые белки (DEP), полученные в результате измерения экспрессии 92 белков, связанных с воспалением, в супернатантах культур через 6-24-72 часа (n = 41). Эти белки были сопоставлены с соответствующей мРНК и, в более широком смысле, с известными взаимодействующими ТФ.

Результаты

Прогестерон подавляет активацию Т-клеток и влияет на транскриптомный профиль в активированных CD4

Чтобы изучить влияние Р4 на Т-клетки CD4 ⁺ и активацию Т-клеток, мы установили в vitro , где первичные человеческие CD4 ⁺ Т-клетки были предварительно инкубированы с P4 перед активацией, что отражает ситуацию in vivo , когда Т-клетки будут постоянно подвергаться воздействию P4 до контрольного заражения антигеном.Затем клетки культивировали неактивированными или с обычно используемой комбинированной активацией через рецептор Т-клеток (анти-CD3) и костимулирующий CD28 (анти-CD28) в присутствии или в отсутствие P4 в течение 6, 24 и 72 часов (рис. 1A. ). Эти временные точки были выбраны, чтобы в основном уловить влияние P4 на клеточные и транскриптомные события, вовлеченные в активацию Т-клеток, ведущую к клональной экспансии и дифференцировке. Мы использовали уровень стимуляции от низкого до умеренного, измеренный по доле активированных Т-клеток, экспрессирующих маркеры поверхностной активации (6 часов CD69, среднее ± стандартное отклонение неактивированных: 0.2% ± 0,04, активировано: 15% ± 9,5; 24 часа CD69, неактивированный: 0,2% ± 0,07, активированный: 20% ± 9,4; 24 часа CD25, неактивированный: 6,5% ± 1,4, активированный: 16% ± 4,7) (Рисунки 1B – D). Активация Т-клеток CD4 ⁺ в присутствии различных концентраций P4 снижала уровень активации клеток дозозависимым образом, со снижением доли как клеток, экспрессирующих CD69, так и CD25, при воздействии самой высокой концентрации P4 (50 мкМ) привело к наибольшему общему снижению (6 часов: CD69 p <0.010 , изменение в 0,4 ± 0,1 раза по сравнению с активацией без P4 p <0,0001 ; 24 часа: CD69 p <0,001 , 0,4 ± 0,1-кратное изменение p <0,0001 и CD25 p <0,0001 , 0,5 ± 0,1-кратное изменение p <0,0001 ) (Рисунки 1B – D и Рисунок S2). Затем мы выполнили транскриптомный анализ с использованием RNA-Seq на CD4 ⁺ T-клетках, активированных в течение 6 и 24 часов в присутствии (50 мкМ P4) или в отсутствие P4 вместе с неактивированными клетками, чтобы получить подробную картину того, как T На активацию клеток влияет P4.Чтобы получить начальное понимание транскриптомных изменений в масштабе всего генома, мы выполнили неконтролируемую кластеризацию образцов с использованием многомерного масштабирования, которое показало четкие различия между клетками, активированными в присутствии или в отсутствие P4, а также по сравнению с неактивированными клетками (рисунки 1E, F). Действительно, анализ дифференциальной экспрессии показал, что Р4 индуцировал значительные изменения в профиле экспрессии генов активированных Т-клеток CD4 ⁺ как через 6, так и через 24 часа (по сравнению с активацией в отсутствие Р4), называемых генами ответа Р4.В общей сложности, воздействие P4 привело к 4276 DEG (FDR ≤0,05; 2080 повышенная регуляция и 2196 пониженная регуляция) через 6 часов и 4756 DEG (2340 повышенная регуляция и 2416 пониженная регуляция) через 24 часа (Рисунки 1G, H). .

Анализ обогащения набора генов показывает преимущественно подавляющий эффект прогестерона на иммунные пути, особенно влияющие на гены, связанные с активацией Т-клеток

Чтобы получить более полное представление о функциональном значении генов ответа P4, мы провели анализ GSE.Некоторые иммунные пути, связанные с передачей сигналов Т-лимфоцитами и ниже по ней, были значительно подавлены Р4 как через 6, так и через 24 часа, например, передача сигналов рецептора Т-клеток, передача сигналов JAK-STAT, взаимодействия цитокин-цитокиновый рецептор, а также многие иммуноассоциированные пути заболевания (Рисунки 2A, B и Таблица S1). Через 24 часа несколько путей, связанных с дифференцировкой Т-клеток (дифференцировка T _H 1, T _H 2 и T _H 17), также были затронуты P4. Поразительно, но анализ GSE показал, что очень мало путей активируется с помощью P4, хотя было почти равное количество генов ответа P4, которые были активированы или подавлены.Более того, ни один из активированных путей не был иммунным (Таблица S1). Поскольку нами и другими исследователями было обнаружено, что P4 оказывает подавляющее действие на активацию Т-клеток, мы исследовали, связаны ли изменения, вызванные P4, с генами, участвующими в самом процессе активации Т-клеток. Поэтому мы оценили, может ли P4 противодействовать изменениям, вызванным во время активации, анализируя перекрытие между генами ответа P4 и генами, участвующими в активации Т-клеток, , то есть генов, дифференциально экспрессируемых в активированных по сравнению с неактивированными Т-клетками.Действительно, наблюдалось поразительное совпадение между DEG, которые активируются во время активации Т-клеток и подавляются P4 (6 часов: отношение шансов (OR): 9,1, p = 2,6×10 ^-220 ; 24 часа: OR: 16,1, p = 1,6 x10 ^-481 ; фиг. 2C) и между DEG, подавляющими во время активации Т-лимфоцитов и активируемыми P4 (6 часов: OR: 4,4, p = 1,6×10 ^-125 ; 24 часа: OR: 5,1, p = 5,9×10 ^-195 ; фигура 2D), демонстрируя, что P4 значительно влияет на гены, связанные с фактической активацией Т-клеток, противодействуя некоторым изменениям, индуцированным во время активации.Напротив, несколько генов одновременно активировали или подавляли активацию как Р4, так и Т-клеток (данные не показаны).

Рисунок 2 Прогестерон подавляет иммунные пути во время активации CD4 ⁺ Т-клеток. (A, B) Гистограммы, показывающие нормализованную оценку обогащения на оси x из анализа обогащения набора генов KEGG генов ответа P4 (DEG сравнивают активацию в присутствии P4 по сравнению с активацией отдельно) на 6 и 24 часовВсе пути имеют скорректированное значение p FDR <0,05. (C, D) Диаграммы Венна перекрывающихся DEG между генами с повышенной и пониженной регуляцией в Т-клетках, активированных в присутствии или в отсутствие 50 мкМ P4. n = 3 неактивировано, n = 8 активировано с 50 мкМ P4 и без него. ДЭГ, дифференциально экспрессируемые гены: OR — отношение шансов; P4, прогестерон.

Демпфирующий эффект прогестерона на экспрессию генов CD4

Чтобы выяснить, влияет ли P4 на протеомный уровень, мы провели скрининг 92 белков, связанных с воспалением. в культуральных супернатантах, собранных через 6, 24 и 72 часа, с использованием анализа расширения близости с высокой чувствительностью и специфичностью (47).Через 6 часов были обнаружены только 24 из 92 белков, из которых 14 (58%) белков по-разному экспрессировались между CD4 ⁺ Т-клетками, культивировавшимися в присутствии по сравнению с в отсутствие P4 (Рисунок 3A и Таблица S2. ). Через 24 часа 39 из 92 белков были обнаружены, и 28 (72%) из них были дифференциально экспрессированы, а через 72 часа было обнаружено 65 белков, но только 23 (35%) экспрессировались дифференциально (Рисунок 3A и Таблица S2). В соответствии с транскриптомными данными, большинство DEP были значительно ниже в супернатантах, собранных из Т-клеток, которые были активированы в присутствии P4, по сравнению с активацией отдельно.Только три белка (ADA, CXCL5 и EIF4EBP1) были активированы через 24 и / или 72 часа. Также на уровне белка P4, по-видимому, противодействовал изменениям, индуцированным во время активации, когда большинство белков, которые значительно усиливались во время активации Т-клеток (по сравнению с неактивированными клетками), подавлялись с помощью P4 (рисунки 3B-D), за исключением ADA (24 и 72). ч), CCL8 (72 часа), CXCL5 (24 часа), EIF4EBP1 (24 часа), интерлейкин (IL) -6 (72 часа) и TNFSF12 (24 часа). Было пять белков, которые постоянно подавлялись во всех трех временных точках: CXCL8, CCL8, IL-17A, фактор некроза опухоли (TNF) и FLT3LG (рис. 3E).Таким образом, подавляющий эффект P4 на связанные с иммунной системой процессы на транскриптомных уровнях дополнительно подтверждается его очевидным подавляющим действием на белки, связанные с воспалением.

Рис. 3 P4 значительно подавляет экспрессию белка в супернатантах культур. Панель белков, связанных с воспалением, измеряли в супернатантах, собранных из CD4 ⁺ Т-клеток, которые были культивированы неактивированными или активированными с использованием или без 50 мкМ P4 (n = 9 в течение 6 часов, n = 10 в течение 24 часов и n = 10 в течение 72 часов). (A) Volcano графики дифференциально экспрессируемых белков (DEP) через 6, 24 и 72 часа, сравнивающие активацию в присутствии или в отсутствие P4. DEP определяли с помощью теста Фридмана и Бенджамини-Хохберга. Данные представлены как разница в нормированных значениях экспрессии белка (NPX), предоставленных производителем. Синие точки DEP регулируются с понижением P4, красные точки активизируют DEP и серые точки FDR ≤ 0,05. (B – D) Тепловые карты дифференциально экспрессируемых белков, сравнивающие активацию в присутствии P4 и только активацию.ns представляют собой белки, которые существенно не различались между активацией и неактивированными. Медианные значения NPX показаны на рисунке. нс, незначительно. (E) Диаграмма Венна, показывающая количество уникальных и общих DEP в разные моменты времени.

Прогестерон значительно подавляет гены, связанные с иммуноопосредованными заболеваниями, которые модулируются во время беременности

Тот факт, что уровни P4 во время беременности совпадают с клиническими изменениями, наблюдаемыми при нескольких иммуноопосредованных заболеваниях, побудил нас исследовать, могут ли гены, на которые влияет P4, и.е. генов ответа P4 были связаны с установленными генами, связанными с заболеванием. С этой целью мы использовали связанные с заболеванием гены, полученные из DisGeNET (48), для семи заболеваний, которые, как было показано ранее, изменяются во время беременности (51): болезнь Хашимото, болезнь Грейвса, рассеянный склероз, псориаз, РА, системная красная волчанка ( СКВ) и системный склероз. Мы объединили гены ответа P4 как через 6, так и через 24 часа, в результате получили в общей сложности 2563 гена с пониженной регуляцией и 2403 гена с повышенной регуляцией, которые дифференциально экспрессировались P4 в течение 24 часов.В соответствии с предыдущим открытием гораздо более выраженного подавляющего действия P4 на гены, связанные с иммунитетом, гены ответа P4 с подавленной реакцией были значительно обогащены генами, связанными со всеми семью заболеваниями; Болезнь Хашимото (n = 51, OR: 2,6, p = 1,6×10 ^-7 ), болезнь Грейвса (n = 73, OR: 2,0, p = 2,3×10 ^-6 ), псориаз (n = 134, OR : 1,4, p = 5,8×10 ^-4 ), MS (n = 201, OR: 1,6, p = 7,0×10 ^-8 ), RA (n = 270, OR: 1,3, p = 6,8×10 ^-4 ), СКВ (n = 212, ИЛИ: 1.7, p = 1,4×10 ^-9 ) и системный склероз (n = 96, OR: 1,5, p = 8,5×10 ^-4 ), тогда как гены ответа с повышенной регуляцией P4 не показали значительного обогащения каких-либо генов, связанных с заболеванием (рисунок 4A и Таблица S3). Таким образом, для последующего анализа рассматривались только гены ответа P4 с пониженной регуляцией. Всего было 17 общих генов между всеми семью заболеваниями, которые были значительно подавлены P4: BCL2 , CXCL10 , FAS , FOXP3 , ICAM1 , IL10 , IL17A IL17A , , IL1B , IL21 , IL22 , IL23R , IL2R , ISG20 , RBM45 , TGFB1 и TNF (рис. патогенез заболевания.

Рис. 4 Прогестерон подавляет гены, связанные с заболеванием, для некоторых аутоиммунных заболеваний, в частности, через STAT1 и STAT3. Влияние P4 на гены, связанные с заболеванием, и вышестоящие факторы транскрипции исследовали с использованием известных генов болезни (полученных из DisGeNET), а взаимодействия TF-мишени были основаны на TRRUST и DoRothEA. (A) Обогащение связанных с заболеванием генов семи аутоиммунных заболеваний среди дифференциально экспрессируемых генов с помощью P4.DEG с пониженной регулировкой = синие столбцы, DEG с повышенным уровнем = красные столбцы. ДЭГ определяли, сравнивая клетки, активированные в присутствии Р4, с активацией отдельно, и представляли общее количество уникально экспрессируемых генов через 6 и 24 часа вместе. Пунктирная линия показывает p = 0,05. Гены, которые являются общими для всех семи заболеваний среди генов, дифференциально подавляемых с помощью P4, показаны над полосами. Значения p обогащения рассчитывали с помощью точного критерия Фишера. ТФ с наибольшим количеством взаимодействующих генов среди ассоциированных с заболеванием генов с дифференцированной подавляемой регуляцией для (B) общих генов семи различных заболеваний (всего из 36 TF) и (C) общих генов между MS, RA и псориаз (всего из 57 ТФ). (D, E) Схематическое изображение STAT1 и STAT3 и их взаимодействующих генов. STAT1 и STAT3 значительно подавляются P4, как и их цели, изображенные на рисунке. ДЭГ, дифференциально экспрессируемые гены; РС; рассеянный склероз; Р4, прогестерон; РА, ревматоидный артрит; ТФ, фактор транскрипции.

Изменения, вызванные прогестероном в генах, связанных с заболеванием, обогащены мишенями для STAT1 и STAT3

Чтобы получить более полное представление о влиянии P4 на изменения, связанные с заболеванием, мы попытались определить вышестоящие регуляторы генов пораженных заболеваний.Используя известные подтвержденные взаимодействия TF-мишени, сочетающие TRRUST (49) и DoRothEA (50), мы определили, что в общей сложности 36 TF были значительно затронуты P4 и вместе регулировали 12 из 17 общих генов болезни. STAT1 и STAT3 значительно подавлялись P4 и имели наибольшее количество генов-мишеней. Кроме того, мишени STAT1 и STAT3 были значительно обогащены среди генов болезни (STAT1: n = 9, OR: 9,5, p = 0,0004; STAT3: n = 7, OR: 11,8, p = 0,0001) (рисунок 4B и таблица S4). ). Затем мы сосредоточились на РС, РА и псориазе, которые, как было показано, заметно улучшаются во время беременности (52–54), чтобы более конкретно определить, на какие TF и ​​гены влияет P4.Всего было 62 общих гена между тремя заболеваниями, которые были значительно подавлены P4 (Таблица S5). В общей сложности 57 различных ТФ были аннотированы для регулирования 39 из этих общих генов (2,6 среднего числа взаимодействий на ТФ), где снова мишени для STAT1 и STAT3 были значительно обогащены среди общих генов, связанных с заболеванием (STAT1: n = 19, целевые 48 % общих генов, OR: 3,2, p = 0,001; STAT3: n = 14, нацелено на 36% общих генов, OR: 5,6, p = 3,0×10 ^-5 ) (рисунки 4C – E и таблица S5) .Таким образом, подавляющий эффект P4 на гены, ассоциированные с заболеванием, по-видимому, в первую очередь опосредуется нацеливанием на STAT1 и STAT3 и их нижестоящие мишени.

Связанные с заболеванием транскриптомные изменения, вызванные прогестероном, отражаются на уровне протеомики

Чтобы еще больше подчеркнуть роль P4 в связанном с беременностью улучшении MS, RA и псориаза, мы исследовали, отражаются ли связанные с заболеванием транскриптомные изменения на уровне белка. Таким образом, мы идентифицировали белки, в которых известные взаимодействующие TF, согласно TRRUST и DoRothEA, также были значительно затронуты P4, а ген, связанный с заболеванием, а также соответствующий белок были значительно подавлены P4.Мы объединили все белки, которые были значительно подавлены P4 через 6, 24 и 72 часа, чтобы получить глобальную карту протеомных изменений, в результате чего получился 41 DEP. Сосредоточившись на STAT1 и STAT3, мы обнаружили, что несколько связанных с заболеванием белков ниже STAT1 и STAT3 значительно снижены на P4: IL-12β (STAT1), IL-10 (STAT1, STAT3), IL-2 (STAT3), CXCL10 ( STAT1), OSM (STAT3) и TGF-β1 (STAT3) (Таблица 1). Кроме того, мы обнаружили три дополнительных белка, которые также были связаны с заболеванием, соответствующие гены которых были значительно подавлены P4: TNF, TNFSF10 и IL-13 (Таблица 1).Таким образом, для девяти белков, связанных с воспалением, мы можем подтвердить, что транскриптомные изменения, индуцированные P4, также отражались на протеомных уровнях. Взятые вместе, P4 значительно влияет на экспрессию TF, приводя к подавлению взаимодействующих генов, связанных с заболеванием, что, в свою очередь, снижает экспрессию соответствующих белков.

Таблица 1 Гены и белки, ассоциированные с заболеванием, и соответствующие им факторы транскрипции, на которые значительно влияет P4.

Обсуждение

В настоящем исследовании мы демонстрируем, что P4 значительно подавляет активацию Т-клеток, что дает убедительное объяснение того, как ответы Т-клеток потенциально могут регулироваться во время беременности, когда уровни P4 высоки и требуется иммунная регуляция. Транскриптомный анализ показал, что P4 значительно изменяет профиль экспрессии генов, подавляя связанные с иммунитетом гены и пути, такие как JAK-STAT и передачу сигналов Т-клеточного рецептора. Интересно, что транскриптомные изменения, индуцированные P4, были сильно обогащены генами, связанными с иммуноопосредованными заболеваниями, которые, как известно, модулируются во время беременности, такие как MS, RA, псориаз и SLE.Кроме того, STAT1 и STAT3 были выделены как центральные регуляторы, и несколько нижестоящих мишеней были значительно подавлены P4, также на уровне белка, включая несколько хорошо известных и значимых для болезни цитокинов. Наши результаты расширяют предыдущие знания о P4 как иммунорегуляторном гормоне и предоставляют дополнительные знания о том, как P4 влияет на активацию Т-клеток CD4 ⁺ и его потенциальное участие в модуляции связанного с беременностью заболевания, наблюдаемого при нескольких иммуноопосредованных заболеваниях.В совокупности наши результаты подтверждают роль P4 как иммуносупрессивного гормона и указывают на то, что P4 играет важную роль в иммуномодулирующих реакциях, вызванных беременностью. Наши результаты открывают путь к исследованию новых терапевтических режимов, имитирующих ситуацию беременности, при иммуноопосредованных заболеваниях.

Предыдущие исследования изучали влияние P4 на активацию лимфоцитов и CD3 ⁺ Т-клеток (35, 55–58), и наши результаты согласуются с подавляющим эффектом P4 на иммунные ответы.Однако, насколько нам известно, настоящее исследование является не только первым исследованием, направленным на прямую оценку влияния P4 на активацию Т-клеток CD4 ⁺ человека, но и первым исследованием, в котором выполнено углубленное транскриптомное профилирование для расшифровки эффектов P4. Используя систему активации Т-клеток in vitro , было обнаружено, что P4 последовательно ингибирует активацию Т-клеток, что очевидно из снижения экспрессии маркеров активации клеточной поверхности и глубокого подавления иммунных генов и белков.Кроме того, изменениям, которые были специфически связаны с фактической активацией Т-клеток, действительно противодействовал P4, , то есть генов и белков, активированных во время активации Т-клеток, подавлялись P4 и , наоборот, . Активация Т-клеток действительно является важной контрольной точкой для иммунной регуляции как толерантности к беременности (59), так и аутоиммунитета (33, 60), и было показано, что введение Р4 предотвращает вызванные активацией Т-клеток преждевременные роды и преждевременные роды на животной модели (61 ), подчеркивая важность P4 в контроле активации Т-клеток во время беременности.

P4 был предложен в качестве одного потенциального кандидата для индуцированной беременностью иммунной модуляции нескольких аутоиммунных заболеваний, учитывая корреляцию уровней P4 с активностью заболевания во время беременности. Действительно, предварительное лечение P4 при экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите (EAE) на животной модели рассеянного склероза ослабляло тяжесть заболевания и уменьшало воспалительные реакции (62, 63). Кроме того, даже после начала EAE введение P4 могло значительно снизить тяжесть заболевания (64). Наши данные о том, что индуцированные P4 гены были значительно обогащены генами, связанными с заболеванием, относящимися к нескольким аутоиммунным заболеваниям, которые, как известно, модулируются во время беременности, обеспечивают дополнительную поддержку возможного участия P4 в активности, модулирующей это заболевание.Интересно, что при всех заболеваниях было несколько перекрывающихся генов, что указывает на потенциально общие механизмы модуляции, вызванной беременностью. Действительно, трудно предположить, какие концентрации P4 будут иметь отношение к иммуномодуляции, вызванной беременностью. Мы использовали концентрации P4, аналогичные или более высокие, чем в плаценте (65), с наиболее выраженным демпфирующим эффектом при самой высокой концентрации. Релевантность выбранных концентраций для модуляции заболевания, вызванного беременностью, может быть оспорена с учетом более низких системных концентраций P4 (66).Однако экстраполяция уровней in vivo на in vitro остается проблематичной. In vivo , есть несколько других факторов и вовлеченных клеток, которые потенциально могут усиливать гормональные эффекты. Действительно, локальные межклеточные концентрации могут быть выше, чем измеряемые в настоящее время уровни, что может объяснить, почему наиболее часто используются супрафизиологические концентрации in vitro. Кроме того, циркулирующие материнские иммунные клетки секвестрируются в плаценте, где они вступают в тесный контакт с производящими гормоны клетками плода (67) и, таким образом, потенциально могут подвергаться воздействию гораздо более высоких уровней P4, чем в периферическом кровообращении.

STAT1 и STAT3, которые, как было обнаружено, значительно подавляются P4, вовлечены в патогенез некоторых аутоиммунных заболеваний. Например, было показано, что потеря экспрессии STAT3 в Т-клетках обеспечивает защиту от EAE (68), а высокие уровни STAT3 можно использовать для прогнозирования конверсии клинически изолированного синдрома в определенный MS (69). Более того, нацеливание на STAT3 было предложено в качестве потенциального терапевтического подхода при таких заболеваниях, как MS, псориаз и RA (70–72).STAT1 и STAT3 являются центральными TF в управлении дифференцировкой клеток T _H 1 и T _H 17. Ранее было показано, что P4 подавляет иммунные ответы, связанные как с T _H 1, так и с T _H 17 (20, 73–76), и предполагается, что он играет важную роль в переходе от T _H 1 / T _H 17 в пользу большего количества ответов T _H 2 / T _reg во время беременности (19). Предполагается, что подавляющий эффект P4 на STAT1 и STAT3 может быть вовлечен в изменение баланса T _H 1 и T _H 17, иммунных ответов, которые являются важной частью патогенеза болезни при РС, псориазе и РА, которые может быть возможным механизмом модуляции активности заболевания, вызванной беременностью.Наши транскриптомные результаты были дополнительно подтверждены на уровне белка для нескольких очень важных мишеней заболевания, расположенных ниже STAT1 и STAT3. Нацеливание на IL-12β (IL12p40), который представляет собой перекресток между T _H 1-ассоциированным IL-12 и T _H 17-связанным IL-23, успешно применяется для лечения псориаза и проходит клинические испытания для нескольких других иммуноопосредованные воспалительные заболевания (77). Ясно, что IL-12β играет важную роль в заболевании, и подавляющий эффект P4 на этот ген и последующая экспрессия белка могут, таким образом, составлять возможный путь в модуляции болезни с помощью P4.Примечательно, что P4 не только подавлял провоспалительные, но и противовоспалительные гены и белки, такие как IL-10 и TGF-β, что указывает на то, что P4 вызывает довольно общее подавление иммунных ответов. Хорошо известно, что противовоспалительные реакции часто индуцируются как механизм отрицательной обратной связи во время воспаления, чтобы помочь предотвратить чрезмерные воспалительные реакции и помочь восстановить гомеостаз тканей. Предположительно, поскольку P4 ослабляет иммунные ответы, естественно предположить, что в результате последуют меньшие противовоспалительные реакции.Это иллюстрируется сложной взаимосвязью между STAT3 и IL-10, где промотор IL10 содержит специфический мотив связывания для STAT3, который, по-видимому, контролирует экспрессию IL10 (78). Действительно, повышенная экспрессия STAT3 в Т-клетках пациентов с СКВ способствовала экспрессии IL-10 (79), и аналогичные ассоциации были предложены также между STAT3 и TGF-β (80, 81).

Одним из потенциальных ограничений нашего исследования является то, что мы исследовали эффект P4 у здоровых женщин-доноров.Насколько нам известно, нет исследований, которые бы специально оценивали, будут ли пациенты с аутоиммунными заболеваниями иначе реагировать на P4, чем здоровые люди. Кроме того, реакция на P4 может варьироваться, поскольку экспрессия рецепторов, связанных с P4, может варьироваться на протяжении менструального цикла (82, 83). Женщины, включенные в это исследование, были отобраны равномерно в течение менструального цикла, что должно минимизировать систематическую ошибку в различиях экспрессии рецепторов. Кроме того, клетки всех включенных женщин последовательно реагировали на P4.Кроме того, в качестве потенциального варианта лечения необходимо дополнительно изучить влияние P4 на мужчин. Действительно, введение P4 показало широко распространенные физиологические эффекты у мужчин (84), хотя подробные исследования воздействия на мужскую иммунную систему отсутствуют. Интересно, что обнадеживающие результаты были отмечены в недавнем пилотном клиническом исследовании, в котором прогестерон использовался у пациентов мужского пола с COVID-19 с целью смягчить гиперактивную иммунную систему, а иногда и фатальный цитокиновый шторм.Примечательно, что не сообщалось о серьезных побочных эффектах, связанных с прогестероном, даже при уровнях прогестерона, подобных тем, которые были обнаружены во время беременности (85). Хотя необходимы дальнейшие исследования, исследование подчеркивает потенциал использования прогестерона для лечения мужчин.

Еще одно предупреждение, которое еще не решено, — это точные механизмы, с помощью которых работает P4. Расшифровка рецепторов, которые участвуют в опосредовании эффектов P4, довольно сложна из-за беспорядочной природы P4, потенциально связывающей как мембранные, так и ядерные рецепторы прогестерона (PR), а также рецепторы глюкокортикоидов и минералокортикоидов.В отличие от мышей, в большинстве исследований на людях не удалось обнаружить экспрессию ядерного PR в лимфоцитах (24, 86). Также, по нашим данным, ядерного пиара не было. Вместо этого была обнаружена экспрессия мембранных PR PGRMC1, PGRMC2, PAQR6 и PAQR7, что, скорее всего, исключает любое возможное участие ядерного PR. Об экспрессии и передаче сигналов через мембранные PR сообщалось в человеческих Т-клетках (58, 86, 87), что согласуется с наблюдаемыми здесь эффектами. Однако нельзя исключить участие глюкокортикоидного рецептора (88, 89), и было показано, что синтетический кортикостероид дексаметазон оказывает такое же влияние на дифференцировку Т-клеток, что и P4 (76).Скорее всего, наблюдаемый эффект P4 представляет собой комбинаторный эффект, опосредованный через различных рецепторов. Потребуются дальнейшие исследования, чтобы проанализировать участие и важность различных рецепторов в передаче сигналов P4, например, посредством блокирования действия различных рецепторов. Недавно описанный специфический антагонист глюкокортикоидов (CORT125134) без связывания PR (90) в сочетании с синтетическими прогестинами с различным сродством к различным рецепторам может улучшить понимание вклада глюкокортикоидного рецептора по сравнению с PR.

Таким образом, мы показали, что присутствие P4 значительно снижает активацию Т-клеток CD4 ⁺ и индуцирует большие транскриптомные изменения в активированных клетках. Наиболее заметно подавляемые P4 иммунные ответы, связанные с активацией Т-клеток, и гены, на которые воздействует P4, были значительно обогащены связанными с заболеванием генами иммуноопосредованных заболеваний, которые, как известно, модулируются во время беременности. Мы пришли к выводу, что наше исследование подтверждает роль P4 в иммуномодуляции, индуцированной во время беременности, и что P4 следует дополнительно оценивать как потенциальный вариант лечения при заболеваниях, опосредованных Т-клетками.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях. Названия репозитория / репозиториев и номера доступа можно найти ниже: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/, GSE162051.

Заявление об этике

Исследования с участием людей были рассмотрены и одобрены Региональным советом по этике в Линчёпинге (Regionala etikprövningsnämnden i Linköping), Швеция (номер одобрения: M39-08). Участники предоставили письменное информированное согласие на участие в этом исследовании.

Вклад авторов

SH, JR и GP собрали образцы и провели эксперименты на культуре клеток и проточную цитометрию. SH, OR и RM выполнили предварительную обработку, анализ данных секвенирования РНК и биоинформатический анализ. JE, MG и MJ внесли свой вклад в дизайн исследования и общее руководство исследованием. SH отвечал за подготовку рисунков и написание рукописи при поддержке MG, JE и MJ. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование финансировалось Шведским фондом стратегических исследований (SB16-0011), Шведским исследовательским советом (2018-02776), Шведским фондом исследований РС, NEURO Sweden, Шведским медицинским обществом (SLS-879791) ) и исследовательские фонды Шведского фонда львов.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Выражение признательности

Авторы выражают признательность Национальной инфраструктуре геномики (NGI) в Стокгольме, финансируемой лабораторией Science for Life, Фондом Кнута и Алисы Валленберг, Шведским исследовательским советом и Многопрофильным центром передовых вычислительных наук SNIC / Упсалы за помощь в массовое параллельное упорядочение и доступ к вычислительной инфраструктуре UPPMAX. Авторы также хотели бы поблагодарить Центр клинических биомаркеров SciLifeLab в Швеции за помощь в анализе белков.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2021.672168/full#supplementary-material

Ссылки

3. Labarta E , Мариани Г., Хольтманн Н., Селада П., Ремохи Дж., Бош Э. Низкий уровень прогестерона в сыворотке в день переноса эмбриона связан со снижением продолжающейся беременности в циклах донорства ооцитов после подготовки искусственного эндометрия: перспективное исследование. Hum Reprod (2017) 32: 2437–42. doi: 10.1093 / humrep / dex316

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Lydon JP, DeMayo FJ, Funk CR, Mani SK, Hughes AR, Montgomery CA Jr, et al. Мыши, лишенные рецептора прогестерона, демонстрируют плейотропные репродуктивные аномалии. Genes Dev (1995) 9: 2266–78. doi: 10.1101 / gad.9.18.2266

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Ку Ч.В., Аллен Дж.С. младший, Лек С.М., Чиа М.Л., Тан Н.С., Тан Т.С.Распределение прогестерона в сыворотке при нормальной беременности по сравнению с беременностями, осложненными угрозой выкидыша на сроке от 5 до 13 недель беременности: проспективное когортное исследование. BMC Беременность и роды (2018) 18: 360. doi: 10.1186 / s12884-018-2002-z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Окабе Х, Макино С., Като К., Мацуока К., Секи Х., Такеда С. Влияние прогестерона на гены, участвующие в преждевременных родах. J Reprod Immunol (2014) 104-105: 80–91.DOI: 10.1016 / j.jri.2014.03.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Arck PC, Rucke M, Rose M, Szekeres-Bartho J, Douglas AJ, Pritsch M, et al. Факторы раннего риска выкидыша: проспективное когортное исследование беременных женщин. Репродукция BioMed Online (2008) 17: 101–13. doi: 10.1016 / S1472-6483 (10) 60300-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Couzinet B, Le Strat N, Ulmann A, Baulieu EE, Schaison G.Прерывание ранней беременности антагонистом прогестерона RU 486 (мифепристон). N Engl J Med (1986) 315: 1565–70. doi: 10.1056 / NEJM198612183152501

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Джарде А., Луцив О., Бейене Дж., Макдональд С.Д. Вагинальный прогестерон, пероральный прогестерон, 17-OHPC, Cerclage и пессарий для предотвращения преждевременных родов при одноплодной беременности с повышенным риском: обновленный систематический обзор и сетевой мета-анализ. BJOG (2019) 126: 556–67.doi: 10.1111 / 1471-0528.15566

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Confavreux C, Hutchinson M, Hours MM, Cortinovis-Tourniaire P, Moreau T. Частота рецидивов рассеянного склероза, связанных с беременностью. Беременность в группе рассеянного склероза. N Engl J Med (1998) 339: 285–91. doi: 10.1056 / NEJM1998073033

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Бойд А.С., Моррис Л.Ф., Филлипс К.М., Ментер Массачусетс. Псориаз и беременность: взаимодействие гормонов и иммунной системы. Int J Dermatol (1996) 35: 169–72. doi: 10.1111 / j.1365-4362.1996.tb01632.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Досиоу К., Лати Р. Б., Тулак С., Хуанг С. Т., Джудиче Л. С.. Связанные с интерфероном и другие иммунные гены подавляются в лейкоцитах периферической крови в лютеиновой фазе менструального цикла. J Clin Endocrinol Metab (2004) 89: 2501–4. doi: 10.1210 / jc.2003-031647

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

16.Kalo-Klein A, Witkin SS. Регуляция иммунного ответа на Candida Albicans моноцитами и прогестероном. Am J Obstet Gynecol (1991) 164: 1351–4. doi: 10.1016 / 0002-9378 (91)

-Z

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Мохаммад И., Старская И., Надь Т., Го Дж., Яткин Э., Ваананен К. и др. Альфа-рецептор эстрогена способствует опосредованному Т-клетками аутоиммунному воспалению, способствуя активации и пролиферации Т-клеток. Sci Signal (2018) 11: eaap9415.doi: 10.1126 / scisignal.aap9415

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Пиччинни М.П., ​​Джудизи М.Г., Бьяджиотти Р., Белони Л., Джаннарини Л., Сампоньяро С. и др. Прогестерон способствует развитию Т-хелперных клеток человека, продуцирующих цитокины Th3-типа, и способствует как продукции IL-4, так и мембранной экспрессии CD30 в установленных клонах клеток Th2. J Immunol (1995) 155: 128–33.

PubMed Аннотация | Google Scholar

21. Яо Й, Ли Х, Дин Дж, Ся Й, Ван Л.Прогестерон нарушает антиген-неспецифическую иммунную защиту CD8 Т-клеток памяти посредством гиперметилирования гена интерферона-гамма. PloS Pathog (2017) 13: e1006736. doi: 10.1371 / journal.ppat.1006736

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Su L, Sun Y, Ma F, Lu P, Huang H, Zhou J. Прогестерон ингибирует врожденный иммунный ответ, опосредованный Toll-подобным рецептором 4, в макрофагах, подавляя активацию NF-kappaB и усиливая экспрессию SOCS1. Immunol Lett (2009) 125: 151–5.doi: 10.1016 / j.imlet.2009.07.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Ли Дж. Х., Лайдон Дж. П., Ким Ч. Прогестерон подавляет путь mTOR и способствует образованию индуцированных регуляторных Т-клеток с повышенной стабильностью. Eur J Immunol (2012) 42: 2683–96. doi: 10.1002 / eji.201142317

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Лиссауэр Д., Элдершоу С.А., Инман С.Ф., Кумарасами А., Мосс, Пенсильвания, Килби, Мэриленд. Прогестерон способствует толерантности матери и плода за счет снижения полифункциональности материнских Т-клеток человека и индукции специфического цитокинового профиля. Eur J Immunol (2015) 45: 2858–72. doi: 10.1002 / eji.201445404

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Павия С., Ситери П.К., Перлман Д.Д., Стайтс Д.П. Подавление взаимодействий аллогенных клеток мышей половыми гормонами. J Reprod Immunol (1979) 1: 33–8. doi: 10.1016 / 0165-0378 (79) ^-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Fekecs T, Kalmar-Nagy K, Szakaly P, Nemeth K, Moezzi M, Zapf I, et al.Изменение фактора блокировки прогестерона у пациентов после трансплантации почки. Transplant Proc (2011) 43: 3694–6. doi: 10.1016 / j.transproceed.2011.08.087

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Мьёсберг Дж., Берг Дж., Дженмальм М.К., Эрнеруд Дж. Регуляторные Т-клетки FOXP3 + и Т-хелперы 1, Т-хелперы 2 и Т-хелперы 17 в децидуальной ранней беременности человека. Биол Репрод (2010) 82: 698–705. doi: 10.1095 / biolreprod.109.081208

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32.Тилбург Т., Ролен Д.Л., ван дер Маст Б.Дж., де Гроот-Свингс Г.М., Клейбург С., Шерджон С.А. и др. Доказательства избирательной миграции плода-специфичных CD4 + CD25bright регуляторных Т-клеток из периферической крови в децидуальную оболочку при беременности человека. J Immunol (2008) 180: 5737–45. doi: 10.4049 / jimmunol.180.8.5737

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Хьюз Г.С., Кларк Е.А., Вонг А.Х. Внутриклеточный рецептор прогестерона регулирует CD4 + Т-клетки и Т-клеточно-зависимые ответы антител. J Leukoc Biol (2013) 93: 369–75. doi: 10.1189 / jlb.1012491

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Chien EJ, Chang CP, Lee WF, Su TH, Wu CH. Негеномные иммуносупрессивные действия прогестерона ингибируют PHA-индуцированное подщелачивание и активацию Т-клеток. J Cell Biochem (2006) 99: 292–304. doi: 10.1002 / jcb.20858

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Chien EJ, Liao CF, Chang CP, Pu HF, Lu LM, Shie MC, et al.Негеномные эффекты на Na + / H + -обмен 1 прогестероном и 20альфа-гидроксипрогестероном в Т-клетках человека. J Cell Physiol (2007) 211: 544–50. doi: 10.1002 / jcp.20962

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37. Добин А., Дэвис К.А., Шлезингер Ф., Дренков Дж., Залески С., Джа С. и др. STAR: сверхбыстрый универсальный выравниватель последовательности РНК. Биоинформатика (2013) 29: 15–21. doi: 10.1093 / биоинформатика / bts635

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38.Pertea M, Pertea GM, Antonescu CM, Chang TC, Mendell JT, Salzberg SL. StringTie обеспечивает улучшенную реконструкцию транскриптома на основе считывания последовательности РНК. Nat Biotechnol (2015) 33: 290–5. doi: 10.1038 / nbt.3122

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

39. Робинсон, доктор медицины, Маккарти, ди-джей, Смит, Г.К. edgeR: Пакет биопроводников для анализа дифференциальной экспрессии цифровых данных экспрессии генов. Биоинформатика (2010) 26: 139–40. doi: 10.1093 / биоинформатика / btp616

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

40.McCarthy DJ, Chen Y, Smyth GK. Анализ дифференциальной экспрессии многофакторных экспериментов с РНК-Seq в отношении биологического разнообразия. Nucleic Acids Res (2012) 40: 4288–97. doi: 10.1093 / nar / gks042

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

41. Ричи М.Э., Фипсон Б., Ву Д., Ху Й., Лоу К.В., Ши В. и др. Лимма Пауэрс Дифференциальный анализ экспрессии для секвенирования РНК и исследований микрочипов. Nucleic Acids Res (2015) 43: e47. doi: 10.1093 / nar / gkv007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42.Law CW, Alhamdoosh M, Su S, Dong X, Tian L, Smyth GK и др. Анализ РНК-Seq прост как 1-2-3 с помощью Limma, Glimma и Edger. F1000Res (2016) 5: 1408. doi: 10.12688 / f1000research.9005.2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

47. Assarsson E, Lundberg M, Holmquist G, Bjorkesten J, Thorsen SB, Ekman D, et al. Гомогенный иммуноферментный анализ 96-Plex PEA, демонстрирующий высокую чувствительность, специфичность и отличную масштабируемость. PloS One (2014) 9: e95192. DOI: 10,1371 / журнал.pone.0095192

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48. Пинеро Дж., Рамирес-Ангита Дж. М., Сух-Питарх Дж., Ронзано Ф., Сентено Э., Санс Ф. и др. Платформа знаний DisGeNET для геномики болезней: обновление 2019 г. Nucleic Acids Res (2020) 48: D845 – D55. doi: 10.1093 / nar / gkz1021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

49. Хан Х, Чо Дж. У., Ли С., Юн А., Ким Х, Бэ Д. и др. TRRUST v2: Расширенная справочная база данных о регуляторных взаимодействиях транскрипции человека и мыши. Nucleic Acids Res (2018) 46: D380 – D6. doi: 10.1093 / nar / gkx1013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50. Гарсия-Алонсо Л., Холланд С.Х., Ибрагим М.М., Турей Д., Саез-Родригес Дж. Сравнительный анализ и интеграция ресурсов для оценки активности факторов транскрипции человека. Genome Res (2019) 29: 1363–75. doi: 10.1101 / gr.240663.118

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51. Piccinni MP, Lombardelli L, Logiodice F, Kullolli O, Parronchi P, Romagnani S.Как беременность может повлиять на прогрессирование аутоиммунных заболеваний? Clin Mol Allergy (2016) 14:11. doi: 10.1186 / s12948-016-0048-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

53. Finkelsztejn A, Brooks JB, Paschoal FM Jr, Fragoso YD. Что мы действительно можем сказать женщинам с рассеянным склерозом о беременности? Систематический обзор и метаанализ литературы. BJOG (2011) 118: 790–7. doi: 10.1111 / j.1471-0528.2011.02931.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

54.де Ман Я. А., Долхайн Р. Дж., ван де Гейн Ф. Е., Виллемсен С. П., Хейз Дж. М.. Активность заболевания ревматоидным артритом во время беременности: результаты общенационального проспективного исследования. Arthritis Rheum (2008) 59: 1241–8. doi: 10.1002 / art.24003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

55. Клеменс Л.Е., Ситери П.К., Стайтс Д.П. Механизм иммуносупрессии прогестерона при активации материнских лимфоцитов во время беременности. J Immunol (1979) 122: 1978–85.

PubMed Аннотация | Google Scholar

56. Эринг Г. Р., Кершбаум Х. Х., Эдер С., Небен А. Л., Фангер С. М., Хури Р. М. и др. Негеномный механизм опосредованной прогестероном иммуносупрессии: ингибирование каналов K +, передачи сигналов Ca2 + и экспрессии генов в Т-лимфоцитах. J Exp Med (1998) 188: 1593–602. doi: 10.1084 / jem.188.9.1593

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

57. Кобаяши Х., Мори Т., Сузуки А., Нисимура Т., Нишимото Х., Харада М.Подавление смешанной реакции лимфоцитов прогестероном и эстрадиолом-17бета. Am J Obstet Gynecol (1979) 134: 255–9. DOI: 10.1016 / S0002-9378 (16) 33029-0

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

58. Ndiaye K, Poole DH, Walusimbi S, Cannon MJ, Toyokawa K, Maalouf SW, et al. Действие прогестерона на лимфоциты может быть опосредовано мембранными рецепторами прогестерона. J Reprod Immunol (2012) 95: 15–26. doi: 10.1016 / j.jri.2012.04.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

60.Hellberg S, Eklund D, Gawel DR, Köpsén M, Zhang H, Nestor CE и др. Гены динамического ответа в CD4 + Т-клетках обнаруживают сеть взаимодействующих белков, которая классифицирует активность заболевания при рассеянном склерозе. Cell Rep (2016) 16: 2928–39. doi: 10.1016 / j.celrep.2016.08.036

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

61. Arenas-Hernandez M, Romero R, Xu Y, Panaitescu B, Garcia-Flores V, Miller D, et al. Эффекторные и активированные Т-клетки вызывают преждевременные роды и роды, которые предотвращаются лечением прогестероном. Дж. Иммунол (2019) 202: 2585–608. doi: 10.4049 / jimmunol.1801350

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

62. Garay L, Gonzalez Deniselle MC, Lima A, Roig P, De Nicola AF. Влияние прогестерона на спинной мозг модели рассеянного склероза у мышей. Дж. Стероид Биохим. Мол Биол (2007) 107: 228–37. doi: 10.1016 / j.jsbmb.2007.03.040

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

63. Garay L, Gonzalez Deniselle MC, Meyer M, Costa JJ, Lima A, Roig P, et al.Защитные эффекты введения прогестерона на аксональную патологию у мышей с экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом. Brain Res (2009) 1283: 177–85. doi: 10.1016 / j.brainres.2009.04.057

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

64. Yates MA, Li Y, Chlebeck P, Proctor T., Vandenbark AA, Offner H. Лечение прогестероном снижает тяжесть заболевания и увеличивает уровень IL-10 при экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите. J Neuroimmunol (2010) 220: 136–9.doi: 10.1016 / j.jneuroim.2010.01.013

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

65. Файнштейн В., Бен-Цви З., Шейнер Э., Амаш А., Шейзаф Б., Холькберг Г. Уровни прогестерона при кесаревом сечении и плаценте при нормальных родах. Arch Gynecol Obstet (2010) 281: 387–92. doi: 10.1007 / s00404-009-1125-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

68. Лю Х, Ли Ю.С., Ю ЧР, Эгвуагу CE. Потеря STAT3 в CD4 + Т-клетках предотвращает развитие экспериментальных аутоиммунных заболеваний. J Immunol (2008) 180: 6070–6. doi: 10.4049 / jimmunol.180.9.6070

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

69. Фрисулло Дж., Носити В., Иорио Р., Патанелла А. К., Марти А., Мирабелла М. и др. Постоянство высоких уровней экспрессии pSTAT3 в циркулирующих CD4 + Т-клетках от пациентов с CIS способствует раннему превращению в клинически определяемый рассеянный склероз. J Neuroimmunol (2008) 205: 126–34. doi: 10.1016 / j.jneuroim.2008.09.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

70.Оике Т., Сато Й., Кобаяши Т., Миямото К., Накамура С., Канеко Ю. и др. Stat3 как потенциальная терапевтическая мишень при ревматоидном артрите. Sci Rep (2017) 7: 10965. doi: 10.1038 / s41598-017-11233-w

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

71. Миёси К., Такаиши М., Накадзима К., Икеда М., Канда Т., Тарутани М. и др. Stat3 как терапевтическая мишень для лечения псориаза: клиническое технико-экономическое исследование с использованием STA-21, ингибитора Stat3. J Invest Dermatol (2011) 131: 108–17.doi: 10.1038 / jid.2010.255

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

72. Лю Й., Холдбрукс А.Т., Де Сарно П., Роуз А.Л., Янагисава Л.Л., МакФарланд BC и др. Терапевтическая эффективность подавления пути Jak / STAT в нескольких моделях экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита. J Immunol (2014) 192: 59–72. doi: 10.4049 / jimmunol.1301513

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

73. Xu L, Dong B, Wang H, Zeng Z, Liu W, Chen N, et al.Прогестерон подавляет ответы клеток Th27 и усиливает развитие регуляторных Т-клеток посредством тимических стромальных лимфопоэтин-зависимых механизмов при экспериментальной гонококковой инфекции половых путей. Микробы заражают (2013) 15: 796–805. doi: 10.1016 / j.micinf.2013.06.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

74. Ли Дж. Х., Ульрих Б., Чо Дж., Пак Дж., Ким Ч. Прогестерон способствует дифференцировке Т-клеток пуповинной крови плода человека в Т-регуляторные клетки, но подавляет их дифференцировку в клетки Th27. J Immunol (2011) 187: 1778–87. doi: 10.4049 / jimmunol.1003919

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

75. Абдул Хусейн Г., Азизие Ф., Махсид М., Рагупати Р. Влияние прогестерона, дидрогестерона и эстрогена на выработку цитокинов Th2 / Th3 / Th27 лимфоцитами женщин с рецидивирующим самопроизвольным выкидышем. Дж Репрод Иммунол (2020) 140: 103132. DOI: 10.1016 / j.jri.2020.103132

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

77.Teng MW, Bowman EP, McElwee JJ, Smyth MJ, Casanova JL, Cooper AM и др. Цитокины IL-12 и IL-23: от открытия до целевой терапии иммуно-опосредованных воспалительных заболеваний. Нат Мед (2015) 21: 719–29. DOI: 10,1038 / нм.3895

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

78. Бенкхарт Е.М., Зидлар М., Ведель А., Вернер Т., Циглер-Хайтброк Х.В. Роль Stat3 в индуцированной липополисахаридом экспрессии гена IL-10. J Immunol (2000) 165: 1612–7.doi: 10.4049 / jimmunol.165.3.1612

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

79. Хедрих К.М., Рауэн Т., Апостолидис С.А., Грамматикос А.П., Родригес Родригес Н., Иоаннидис К. и др. Stat3 способствует экспрессии IL-10 в Т-клетках волчанки посредством трансактивации и ремоделирования хроматина. Proc Natl Acad Sci USA (2014) 111: 13457–62. doi: 10.1073 / pnas.1408023111

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

80. Ши Дж., Фэн Дж., Се Дж., Мэй З., Ши Т., Ван С. и др.Нацеленная блокада путей TGF-бета и IL-6 / JAK2 / STAT3 подавляет рост рака легких, стимулируемый миофибробластами костного мозга. Sci Rep (2017) 7: 8660. doi: 10.1038 / s41598-017-09020-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

81. Лю Р.Й., Цзэн Й., Лей З., Ван Л., Ян Х., Лю З. и др. Передача сигналов JAK / STAT3 необходима для индуцированного TGF-бета эпителиально-мезенхимального перехода в раковых клетках легких. Int J Oncol (2014) 44: 1643–51. DOI: 10.3892 / ijo.2014.2310

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

82. Mertens HJ, Heineman MJ, Theunissen PH, de Jong FH, Evers JL. Экспрессия рецепторов андрогенов, эстрогенов и прогестерона в матке человека во время менструального цикла. евро J Obstet Gynecol Reprod Biol (2001) 98: 58–65. DOI: 10.1016 / S0301-2115 (00) 00554-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

83. Mangal RK, Wiehle RD, Poindexter AN, 3, Weigel NL.Дифференциальная экспрессия маточных форм рецепторов прогестерона A и B во время менструального цикла. J Стероид Biochem Mol Biol (1997) 63: 195–202. doi: 10.1016 / S0960-0760 (97) 00119-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

85. Гандехари С., Матусов Ю., Пепковиц С., Штейн Д., Кадери Т., Нараянан Д. и др. Прогестерон в дополнение к стандарту лечения по сравнению со стандартом лечения в одиночку при лечении мужчин, госпитализированных с Covid-19 от умеренной до тяжелой степени: рандомизированное контролируемое пилотное исследование. Сундук (2021 г.). doi: 10.1016 / j.chest.2021.02.024

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

86. Dosiou C, Hamilton AE, Pang Y, Overgaard MT, Tulac S, Dong J, et al. Экспрессия мембранных рецепторов прогестерона на человеческих Т-лимфоцитах и ​​клетках Jurkat и активация G-белков прогестероном. J Endocrinol (2008) 196: 67–77. doi: 10.1677 / JOE-07-0317

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

87.Арейя А., Вале-Перейра С., Алвес В., Родригес-Сантос П., Моура П., Мота-Пинто А. Мембранные рецепторы прогестерона в регуляторных Т-клетках человека: реальность во время беременности. BJOG (2015) 122: 1544–50. doi: 10.1111 / 1471-0528.13294

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

88. Энглер Дж. Б., Курсаве Н., Солано М. Е., Патас К., Верманн С., Хекманн Н. и др. Глюкокортикоидный рецептор в Т-клетках обеспечивает защиту от аутоиммунитета во время беременности. Proc Natl Acad Sci USA (2017) 114: E181 – E90.doi: 10.1073 / pnas.1617115114

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

89. Hierweger AM, Engler JB, Friese MA, Reichardt HM, Lydon J, DeMayo F, et al. Прогестерон модулирует ответ Т-клеток посредством зависимых от глюкокортикоидных рецепторов путей. Am J Reprod Immunol (2019) 81: e13084. doi: 10.1111 / aji.13084

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

90. Hunt H, Donaldson K, Strem M, Zann V, Leung P, Sweet S и др.Оценка безопасности, переносимости, фармакокинетики и фармакологического эффекта перорально вводимого CORT125134: адаптивное, двойное слепое, рандомизированное, плацебо-контролируемое клиническое исследование фазы 1. Clin Pharmacol Drug Dev (2018) 7: 408–21. doi: 10.1002 / cpdd.389

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Прогестерон специфически подавляет связанные с заболеванием Th2- и Th27-связанные иммунные реакции во время активации Т-клеток in vitro

РЕЗЮМЕ

Изменения уровня прогестерона (P4) во время и после беременности совпадают с временным улучшением и ухудшением некоторых аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз (РС) и ревматоидный артрит (РА).Скорее всего, иммунно-эндокринные взаимодействия играют основную роль в этих эффектах, вызывающих беременность. В этом исследовании мы использовали секвенирование следующего поколения, чтобы изучить прямое влияние P4 на активацию Т-клеток CD4 ⁺ , имеющую центральное значение при беременности и заболеваниях. Мы обнаружили, что P4 оказывает сильное подавляющее действие на активацию Т-клеток, изменяя профиль экспрессии генов и белков и противодействуя многим изменениям, вызванным во время активации. Транскриптомные изменения, индуцированные P4, были значительно обогащены генами, связанными с заболеваниями, которые, как известно, модулируются во время беременности, такими как MS, RA и псориаз.Факторы транскрипции, ассоциированные с T _H 1 и T _H 17, STAT1 и STAT3 были значительно подавлены P4, и их нижестоящие мишени были значительно обогащены среди генов, связанных с заболеваниями. Некоторые из этих генов включали хорошо известные и релевантные для заболевания цитокины, такие как IL-12β, CXCL10 и OSM, которые были дополнительно проверены также на уровне белка с использованием анализа расширения близости. Наши результаты расширяют предыдущие знания о P4 как о гормоне, регулирующем иммунную систему, и подтверждают его важность во время беременности для регулирования потенциально пагубных иммунных реакций на полуаллогенный плод.Кроме того, наши результаты также указывают на потенциальную роль P4 в иммуномодуляции заболеваний, вызванных беременностью, предположительно за счет ослабления иммунных ответов, связанных с T _H 1 и T _H 17, и подчеркивает необходимость дальнейших исследований, оценивающих P4 как вариант будущего лечения.

ВВЕДЕНИЕ

Беременность представляет собой уникальное иммунологическое состояние, поскольку иммунная система матери способна переносить присутствие полуаллогенного плода. Считается, что эта иммунологическая толерантность возникает из-за обширных иммунных и эндокринных изменений, вызванных во время беременности ^{1, 2} , спровоцированных повышенным уровнем стероидного гормона прогестерона (P4), который необходим для установления и поддержания беременности. ^3–5 Соответственно, низкие уровни P4 были связаны с несколькими осложнениями беременности ^6–8 и, фактически, лечение антагонистом P4-рецепторов мифепристоном (RU486) приводит к прекращению беременности, ⁹ дальнейшая поддержка важность P4 при беременности. Интересно, что терапевтическое использование P4 во время беременности снижает риск преждевременных родов в определенных группах риска, ¹⁰ подчеркивая потенциальное использование P4 для лечения осложнений беременности.

Роль P4 в основном связана с его влиянием на гомеостаз и ремоделирование миометрия. ¹¹ Однако на важную иммуномодулирующую роль P4 in vivo указывает улучшение, связанное с беременностью, и последующее ухудшение воспалительных заболеваний, таких как рассеянный склероз (РС) и ревматоидный артрит (РА), что совпадает с моменты времени во время и после беременности, когда уровни P4 являются соответственно самыми высокими и самыми низкими. ^12–14 Кроме того, наблюдались различия в иммунных ответах, связанных с высоким и низким уровнями P4 во время менструального цикла. ^{15, 16} Предыдущие исследования иммунно-эндокринных взаимодействий в значительной степени были сосредоточены на том, как эстроген влияет на иммунную систему. Интересно, что уровень эстрогена увеличивается и уменьшается во время беременности аналогично P4. Однако эстроген, по-видимому, обладает как иммунорегулирующими, так и иммуноактивирующими свойствами. ¹⁷ Действительно, эстроген был предложен в качестве основного фактора, объясняющего учащение аутоиммунных заболеваний у женщин. ¹⁸ С другой стороны, in vitro эффекты P4 на различные популяции иммунных клеток подтверждают ключевую роль P4 в регулировании иммунных ответов, которые могут иметь центральное значение для стимулирования толерантности плода. ^19–24 Кроме того, роль P4 как мощного иммуносупрессора подтверждается исследованиями in vivo , показывающими участие P4 в ответ на аллогенную и ксеногенную трансплантацию и отторжение трансплантата у людей.

CD4 ⁺ Т-клетки занимают центральное место в иммунной системе, выступая в качестве главных регуляторов иммунитета и толерантности. ²⁹ Важность CD4 ⁺ Т-клеток во время беременности очевидна по их относительному исключению на границе плод-мать, чтобы ограничить потенциально пагубную активацию, ³⁰ , тогда как регуляторные Т-клетки обогащены, тем самым еще больше ограничивая вредные Т-клетки. ответы. ^{31, 32} Параллельно ограничение активации Т-клеток CD4 ⁺ является важным аспектом при заболеваниях, опосредованных Т-клетками, поскольку аберрантная активация аутореактивных Т-клеток CD4 ⁺ является центральным механизмом в патогенезе заболевания. ³³ Таким образом, регуляция Т-лимфоцитов CD4 ⁺ является общим знаменателем, который может предотвращать нежелательные материнские иммунные ответы на плод, а также объяснять улучшение воспалительных заболеваний во время беременности. Интересно, что было показано, что P4 ограничивает активацию Т-клеток CD4 ⁺ . ^34–36 Однако до сих пор не проведен глубокий анализ точных эффектов P4 на активацию Т-клеток CD4 ⁺ человека и его потенциального участия в модуляции заболевания во время беременности.

Здесь мы сообщаем подробные данные секвенирования РНК, демонстрирующие глубокое прямое влияние P4 на активацию Т-клеток. Более конкретно, P4 индуцировал большие транскриптомные изменения, наиболее заметно снижающие регуляцию, в иммуноассоциированных генах и путях, и что интересно, эти гены были значительно обогащены генами, связанными с заболеваниями, которые, как известно, модулируются во время беременности, включая MS и RA.Эти изменения были в основном связаны с STAT1 и STAT3 и их нижележащими мишенями, что указывает на возможное участие P4 в подавлении иммунных ответов, связанных с T _H 1 и T _H 17, имеющих отношение к заболеванию. Эти данные свидетельствуют о том, что P4 может участвовать в улучшении некоторых воспалительных заболеваний, вызванных беременностью, и представляет собой потенциальный путь для будущих вариантов лечения.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Прогестерон подавляет активацию Т-клеток и влияет на транскриптомный профиль активированных CD4