Com-stil.com S.R.L. — Поиск грузов и транспорта

Искать:

в

КатегорииМедицина, ЗдоровьеТуризм, ОтдыхМебель и ИнтерьерСтроительство и ремонтСтроительные материалыАвто, МотоБизнес и ФинансыБезопасность и ОхранаДеловые услугиТранспортные услугиДрагоценности и УкрашенияИнтернет магазиныКоммуникации и ITКрасота и уход за теломМагазины и торговые центрыНаука и ОбразованиеНедвижимостьНовости и СМИОборудование, ИнструментыПродукты питанияПромышленность и Пр-воРазвлечение, ДосугРеклама и МаркетингСпорт, ФитнесГосударство и ОбществоСельское хозяйствоРегиональный

Моб.

Moldova, 2045, Chisinau, str. Studentilor 7/7

График работы
24/24

Регистрационные данные
ф/к: 0014976

Транспортная железнодорожная грузовая биржа.Перевозки грузов железнодорожными вагонами, доставка грузов по ж.д. доре.Перевозка вагонами Россиия, Молдова, Украинв, Беларуь.Поиск ж.д. вагонов, доставка вагонами.Заказ железнодорожных перевозок

Copyright © 2021 Totul. md. Все права защищены.

ТРАНСПОРТНО-ГРУЗОВАЯ СИСТЕМА CARGOAGENT.NET — Транспортно-грузовая система, грузоперевозки CargoAgent.net

aims to inform you about how Cargoagent treat your personal data as an administrator, and how you can control your preferences and settings for this treatment.

A general data protection regulation (GDPR) has been adopted by the European Union and its purpose is to align the EU Member States’ policies on the collection and use of personal data. Another goal is to guarantee our right to privacy, to protect our personal data in order to provide more security against the misuse of personal information of each and every one of us.

The Cargoagent collects data for all visitors

Data collected by google analytics, they are small text files that are sent from the web server to the browser used and stored on your device so the site can recognize it.
The goals we use cookies are the most basic tracking of your behavior in the following directions:
Tracking sections of the site you visit
How long you spend on a site;
When you visit our site and partner sites
Who we share and disclose your personal information

Data subjects’ rights according to GDPR

Right of access to your personal data: You have the right to receive confirmation from us whether personal data are processed for you and, if this is the case, you have the right to access the personal data and information.

Right to rectification of personal data: If you find that the personal data we process for you are inaccurate, you are entitled to make us correct this personal data.

Right to delete personal data (the right to be forgotten): in certain circumstances, such as if your personal data has been processed unlawfully or you have withdrawn your consent (if the processing of personal data is based on consent), you have the right to request and receive delete your personal data from us.

Limitation of processing: In certain circumstances, such as if you have doubts about the accuracy of your personal data or have objected to our legitimate purpose of processing your personal data, you may request that we restrict the processing of your personal data until it is found solution.
Right of objection to processing: in certain circumstances, such as if you have a legitimate interest in processing your personal data, you have the right to object, for reasons related to your particular situation, to such processing.

Data portability right: If your personal data is processed by automatic means with your consent or in order to perform our contractual relations, you may request that we provide you with your personal data in a machine-readable format for transferring to another data controller.

Right to submit a complaint to a control body: You have the right to complain about the processing of your personal data by us at the relevant control body.

Кухонная студия Твой стиль

• Кухни

  array(3) {
    [0]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(39) "Кухни "Классика""
      ["LINK"]=>
      string(32) "/catalog/kukhni/kukhni-klassika/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(32) "/catalog/kukhni/kukhni-klassika/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(1)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
    [1]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(35) "Кухни "Модерн""
      ["LINK"]=>
      string(30) "/catalog/kukhni/kukhni-modern/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(30) "/catalog/kukhni/kukhni-modern/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(2)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
    [2]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(29) "Столовые группы"
      ["LINK"]=>
      string(32) "/catalog/kukhni/stolovye-gruppy/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(32) "/catalog/kukhni/stolovye-gruppy/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(3)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
  }
  

• Кухни «Классика»
• Кухни «Модерн»
• Столовые группы

array(3) {
  [0]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(22) "Гардеробные"
    ["LINK"]=>
    string(47) "/catalog/korpusnaya-mebel/garderobnye-category/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(47) "/catalog/korpusnaya-mebel/garderobnye-category/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(5)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [1]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(16) "Гостиные"
    ["LINK"]=>
    string(44) "/catalog/korpusnaya-mebel/gostinye-category/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(44) "/catalog/korpusnaya-mebel/gostinye-category/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(6)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [2]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(20) "Библиотеки"
    ["LINK"]=>
    string(37) "/catalog/korpusnaya-mebel/biblioteki/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(37) "/catalog/korpusnaya-mebel/biblioteki/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(7)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
}

array(13) {
  [0]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(39) "Вытяжки встраиваемые"
    ["LINK"]=>
    string(50) "/catalog/bytovaya-tekhnika/vytyazhki-vstraivaemye/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(50) "/catalog/bytovaya-tekhnika/vytyazhki-vstraivaemye/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(10)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [1]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(23) "Вытяжки соло"
    ["LINK"]=>
    string(42) "/catalog/bytovaya-tekhnika/vytyazhki-solo/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(42) "/catalog/bytovaya-tekhnika/vytyazhki-solo/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(11)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [2]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(56) "Варочные панели электрические"
    ["LINK"]=>
    string(59) "/catalog/bytovaya-tekhnika/varochnye-paneli-elektricheskie/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(59) "/catalog/bytovaya-tekhnika/varochnye-paneli-elektricheskie/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(12)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [3]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(44) "Варочные панели газовые"
    ["LINK"]=>
    string(52) "/catalog/bytovaya-tekhnika/varochnye-paneli-gazovye/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(52) "/catalog/bytovaya-tekhnika/varochnye-paneli-gazovye/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(13)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [4]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(54) "Варочные панели индукционные"
    ["LINK"]=>
    string(58) "/catalog/bytovaya-tekhnika/varochnye-paneli-induktsionnye/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(58) "/catalog/bytovaya-tekhnika/varochnye-paneli-induktsionnye/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(14)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [5]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(52) "Духовые шкафы электрические"
    ["LINK"]=>
    string(58) "/catalog/bytovaya-tekhnika/dukhovye-shkafy-elektricheskie/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(58) "/catalog/bytovaya-tekhnika/dukhovye-shkafy-elektricheskie/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(15)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [6]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(40) "Духовые шкафы газовые"
    ["LINK"]=>
    string(51) "/catalog/bytovaya-tekhnika/dukhovye-shkafy-gazovye/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(51) "/catalog/bytovaya-tekhnika/dukhovye-shkafy-gazovye/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(16)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [7]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(40) "СВЧ печи встраиваемые"
    ["LINK"]=>
    string(51) "/catalog/bytovaya-tekhnika/svch-pechi-vstraivaemye/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(51) "/catalog/bytovaya-tekhnika/svch-pechi-vstraivaemye/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(17)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [8]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(49) "Холодильники встраиваемые"
    ["LINK"]=>
    string(53) "/catalog/bytovaya-tekhnika/kholodilniki-vstraivaemye/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(53) "/catalog/bytovaya-tekhnika/kholodilniki-vstraivaemye/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(18)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [9]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(39) "Посудомоечные машины"
    ["LINK"]=>
    string(50) "/catalog/bytovaya-tekhnika/posudomoechnye-mashiny/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(50) "/catalog/bytovaya-tekhnika/posudomoechnye-mashiny/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(19)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [10]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(33) "Стиральные машины"
    ["LINK"]=>
    string(45) "/catalog/bytovaya-tekhnika/stiralnye-mashiny/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(45) "/catalog/bytovaya-tekhnika/stiralnye-mashiny/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(20)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [11]=>
  array(11) {
    ["TEXT"]=>
    string(10) "Мойки"
    ["LINK"]=>
    string(33) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(33) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(21)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(true)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(true)
    ["SUB_ITEMS"]=>
    array(3) {
      [0]=>
      array(10) {
        ["TEXT"]=>
        string(20) "Мойки SILGRANIT"
        ["LINK"]=>
        string(49) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-silgranit/"
        ["SELECTED"]=>
        bool(false)
        ["PERMISSION"]=>
        string(1) "R"
        ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
        array(1) {
          [0]=>
          string(49) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-silgranit/"
        }
        ["ITEM_TYPE"]=>
        string(1) "D"
        ["ITEM_INDEX"]=>
        int(22)
        ["PARAMS"]=>
        array(3) {
          ["FROM_IBLOCK"]=>
          bool(true)
          ["IS_PARENT"]=>
          bool(false)
          ["DEPTH_LEVEL"]=>
          string(1) "3"
        }
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        int(4)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
      }
      [1]=>
      array(10) {
        ["TEXT"]=>
        string(49) "Мойки из нержавеющей стали"
        ["LINK"]=>
        string(65) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-iz-nerzhaveyushchey-stali/"
        ["SELECTED"]=>
        bool(false)
        ["PERMISSION"]=>
        string(1) "R"
        ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
        array(1) {
          [0]=>
          string(65) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-iz-nerzhaveyushchey-stali/"
        }
        ["ITEM_TYPE"]=>
        string(1) "D"
        ["ITEM_INDEX"]=>
        int(23)
        ["PARAMS"]=>
        array(3) {
          ["FROM_IBLOCK"]=>
          bool(true)
          ["IS_PARENT"]=>
          bool(false)
          ["DEPTH_LEVEL"]=>
          string(1) "3"
        }
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        int(4)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
      }
      [2]=>
      array(10) {
        ["TEXT"]=>
        string(25) "Мойки угловые"
        ["LINK"]=>
        string(47) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-uglovye/"
        ["SELECTED"]=>
        bool(false)
        ["PERMISSION"]=>
        string(1) "R"
        ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
        array(1) {
          [0]=>
          string(47) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-uglovye/"
        }
        ["ITEM_TYPE"]=>
        string(1) "D"
        ["ITEM_INDEX"]=>
        int(24)
        ["PARAMS"]=>
        array(3) {
          ["FROM_IBLOCK"]=>
          bool(true)
          ["IS_PARENT"]=>
          bool(false)
          ["DEPTH_LEVEL"]=>
          string(1) "3"
        }
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        int(4)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
      }
    }
  }
  [12]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(18) "Смесители"
    ["LINK"]=>
    string(37) "/catalog/bytovaya-tekhnika/smesiteli/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(37) "/catalog/bytovaya-tekhnika/smesiteli/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(25)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "2"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(3)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
}

array(3) {
  [0]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(20) "Мойки SILGRANIT"
    ["LINK"]=>
    string(49) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-silgranit/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(49) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-silgranit/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(22)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "3"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(4)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [1]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(49) "Мойки из нержавеющей стали"
    ["LINK"]=>
    string(65) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-iz-nerzhaveyushchey-stali/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(65) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-iz-nerzhaveyushchey-stali/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(23)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "3"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(4)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
  [2]=>
  array(10) {
    ["TEXT"]=>
    string(25) "Мойки угловые"
    ["LINK"]=>
    string(47) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-uglovye/"
    ["SELECTED"]=>
    bool(false)
    ["PERMISSION"]=>
    string(1) "R"
    ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
    array(1) {
      [0]=>
      string(47) "/catalog/bytovaya-tekhnika/moyki/moyki-uglovye/"
    }
    ["ITEM_TYPE"]=>
    string(1) "D"
    ["ITEM_INDEX"]=>
    int(24)
    ["PARAMS"]=>
    array(3) {
      ["FROM_IBLOCK"]=>
      bool(true)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      string(1) "3"
    }
    ["DEPTH_LEVEL"]=>
    int(4)
    ["IS_PARENT"]=>
    bool(false)
  }
}

• Столовые группы
• Столешницы и стеновые панели

  array(6) {
    [0]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(6) "Ligron"
      ["LINK"]=>
      string(47) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/ligron/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(47) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/ligron/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(28)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
    [1]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(14) "Скинали"
      ["LINK"]=>
      string(48) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/skinali/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(48) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/skinali/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(29)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
    [2]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(10) "Кварц"
      ["LINK"]=>
      string(56) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/kvarts-category/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(56) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/kvarts-category/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(30)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
    [3]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(10) "Акрил"
      ["LINK"]=>
      string(55) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/akril-category/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(55) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/akril-category/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(31)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
    [4]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(59) "Изделия из искусственного камня"
      ["LINK"]=>
      string(83) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/izdeliya-iz-iskusstvennogo-kamnya-category/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(83) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/izdeliya-iz-iskusstvennogo-kamnya-category/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(32)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
    [5]=>
    array(10) {
      ["TEXT"]=>
      string(20) "Интересное"
      ["LINK"]=>
      string(51) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/interesnoe/"
      ["SELECTED"]=>
      bool(false)
      ["PERMISSION"]=>
      string(1) "R"
      ["ADDITIONAL_LINKS"]=>
      array(1) {
        [0]=>
        string(51) "/catalog/stoleshnitsy-i-stenovye-paneli/interesnoe/"
      }
      ["ITEM_TYPE"]=>
      string(1) "D"
      ["ITEM_INDEX"]=>
      int(33)
      ["PARAMS"]=>
      array(3) {
        ["FROM_IBLOCK"]=>
        bool(true)
        ["IS_PARENT"]=>
        bool(false)
        ["DEPTH_LEVEL"]=>
        string(1) "2"
      }
      ["DEPTH_LEVEL"]=>
      int(3)
      ["IS_PARENT"]=>
      bool(false)
    }
  }
  

• Ligron
• Скинали
• Кварц
• Акрил
• Изделия из искусственного камня
• Интересное

FARAD STIL BULL | Гайки секретки М12×1.

Секретные гайки Farad Stil Bull M12x1.5x34mm с конусной посадкой для оригинальных дисков автомобилей:

Daihatsu Applause, Domino, Feroza, Charade до 2002 года, Terios с 2006 года, Materia с 2007 года, Rocky 4×4

Fiat Fullback с 2016 года

Ford Probe

Hyundai Sonata, Matrix, Elantra, Galloper, Accent до 2001 года, Santa Fe с 2006 по 2010 год, Sonica с 2006 года, i10 с 2008 года, i30 с 2007 по 2017 год, iX35, iX55

Kia Clarus, Picanto, Cerato, Magentis с 2006 года, Pro-Ceed с 2008 года, Sportage с 2005 года, Sorento с 2015 года

Mazda 323 до 1996 года, 929, 626, RX7, Demio, Premacy

Mitsubishi Starion, Tredia, Cordia, Space Wagon, Carisma, Sigma с 1989 года, Montero до 1991 года, Lancer до 2002 года, L200, Pajero до 1991 года, Colt до 2009 года, ASX, Outlander с 2010 года

SsangYong Rexton до 2002 года, Korando с 2002 по 2009 год

Toyota Carina с 1982 по 1987 год, Corolla с 1987 по 1992 год, Corolla с 1997 года, Starlet с 1978 по 1999 год, Land Cruiser Tipo J8 с 1982 по 1989 год, Rav4 до 2003 года

Оригинальные секретки Farad изготовляются на заводе в Италии. В данном комплекте представлено 4 гайки с индивидуальным секретным рисунком и ключом к ним. Внутри упаковки содержится специальный код для возможности восстановления ключа при его потере.

Секретки Farad серии Stil-Bull — самые продаваемые колесные секретки. Доступные уже более 40 лет и подходят ко всем оригинальным колесам послепродажного обслуживания для всех автомобилей (европейских, азиатских, американских автомобилей и т. д.). Комбинации на головке секрета защищены гексагональными колпачками из нержавеющей стали, которые делают вид секреток яркими и привлекательными на ваших колесах.

Завод изготовитель Farad является официальным поставщиком крепежа и секреток для дисков мировых автопроизводителей.

Примечание: На фотографии этого товара представлен только один вид секретного рисунка. При покупке этой позиции Вы можете получить секретки с другим рисунком, который будет отличаться от картинки на сайте, так как секретки Фарад имеют большое количество комбинаций ключа.

РУ — DOLCE STIL NOVO ALLA REGGIA, Reggia di Venaria Reale, Piazza della Repubblica, 4 — Venaria Reale (Torino) Italia,Tel. + 39 011 4992343, Mob. + 39 339.1996218, www.dolcestilnovo.com

Ресторан в королевской резиденции Reggia di Venaria

«Dolce Stil Novo» в королевской резиденции Reggia di Venaria
B Reggia di Venaria находится один из самых знаменитых в Италии ресторанов: Dolce Stil Novo, который вот уже много лет располагается на первых строках гастрономических путеводителей и отмечен звездой престижного гида Michelin. Возглавляет его и управляет кухней шеф-повар и патрон Альфредо Руссо, неоспоримый талант в области высокой кухни в Италии и за рубежом.
Ресторан Dolce Stil Novo является идеальным пунктом соприкосновения между культурой и искусством застолья, являясь кроме того  символом великой и древней традиции дворцовых банкетов. В королевской резиденции Reggia di Venaria ресторан Dolce Stil Novo является местом, предназначенным для приема гостей и для высокой кухни, и его гостями являюся как посетители выставок и экспозиций, так и приезжие клиенты, которые могут попробовать здесь настоящую «королевкую кухню».

Ресторан расположен на верхнем этаже Юго-Восточной башни, спроектированной Микеланджело Гарове в соответствии с французской моделью «padillon-système», в тех самых залах, где три столетия тому назад находились апартаменты придворных дам Савойских принцесс.

После тщательной реставрации, выполненной Комитетом по Надзору за Архитектурным и Природным наследием Пьемонта, возглавляемым Франческо Перниче, внутренние залы были обставлены архитекторами Максом и Леллой Виньелли, которые учли исключительный характер места с точки зрения как истории, так и искусства. Концепция, разработанная архитекторами Карло и Авророй Фучини, вдохновляется «вневременностью» XVIII века, которая проходит сквозь столетия и доходит до нас обновленной благодаря чистоте стиля и линий, стилистически воспроизводя и ассоциируясь с неоклассицизмом XVIII века.

Идеальным дополнением и продолжением всего этого является кухня Альфредо Руссо: инновационная и глубоко личная философия, уходящая корнями в итальянские традиции, предлагается шеф-поваром в блюдах и комбинациях, способных вызвать своего рода коллективную вкусовую память. Таким же образом организован прием гостей и атмосфера ресторана: клиент пониманиет что находится в исключительном месте, однако не чувствует себя каким-либо образом стесненным, а наооборот, воспринимает его как уникальное место где можно получить исключительный гастрономический и культурный опыт.

Вместе со своей жемчужиной, рестораном Dolce Stil Novo, Venaria Reale все больше ассоциируется с местом, посвященным культуре и досугу, где все располагает к мечтам и красоте: начиная от бесконечных садов, величественной архитектуры, коллекций и выставок и заканчивая  вкусом великолепных кулинарных творений Альфредо Руссо.

«Dolce Stil Novo» в королевской резиденции Reggia di Venaria

Dolce Stil Novo alla Reggia

Menu (English version)

Contact (Reservations): Phone + 39 011 4992343, E-Mail Questo indirizzo email è protetto dagli spambots. È necessario abilitare JavaScript per vederlo.

STIL: многофункциональный белок, необходимый для дофаминергической нейрональной пролиферации, защиты и регенерации

1.

Aplan, P. et al. Нарушение локуса scl человека незаконной активностью рекомбиназы V- (D) -J. Science 250 , 1426–1429 (1990).

CAS Статья Google ученый

5.

Стивенс, Н. Р., Доббелаер, Дж., Бранк, К., Франц, А. и Рафф, Дж. У. Дрозофила Ana2 представляет собой консервативный фактор дупликации центриолей. J. Cell Biol. 188 , 313–323 (2010).

CAS Статья Google ученый

9.

David, A. et al. Отсутствие центриолей и первичных ресничек у эмбрионов мышей STIL (- / -). Cell Cycle 13 , 2859–2868 (2014).

CAS Статья Google ученый

13.

Arquint, C., Sonnen, K. F., Stierhof, Y. & Nigg, E. A. Регулируемая клеточным циклом экспрессия STIL контролирует количество центриолей в клетках человека. J. Cell Sci. 125 , 1342–1352 (2012).

CAS Статья Google ученый

17.

Li, J. et al. Функциональная экспрессия Stil защищает дофаминергические клетки сетчатки от дегенерации, вызванной нейротоксинами. J. Biol. Chem. 288 , 886–893 (2013).

CAS Статья Google ученый

24.

Калия, Л. В. и Ланг, А. Э. Болезнь Паркинсона. Ланцет 386 , 896–912 (2015).

CAS Статья Google ученый

53.

Lauth, M., Bergstrom, A., Shimokawa, T. & Toftgard, R. Ингибирование GLI-опосредованной транскрипции и роста опухолевых клеток низкомолекулярными антагонистами. Proc. Natl. Акад. Sci. США 104 , 8455–8460 (2007).

CAS Статья Google ученый

Новые сложные гетерозиготные мутации STIL вызывают тяжелую микроцефалию плода и центриолярное удлинение — FullText — Molecular Syndromology 2017, Vol. 8, № 6

Аннотация

STIL (прерывающий локус SCL / TAL1) является основным компонентом процесса дупликации центриолей. Мутации STIL были связаны как с аутосомно-рецессивной первичной микроцефалией (MCPH), так и с голопрозэнцефалией. В этом отчете мы описываем семью с множественными выкидышами и двумя прерываниями беременности из-за выраженной микроцефалии плода, отсроченной корковой гирификации и дисгенезии мозолистого тела. Полное секвенирование экзома позволило нам идентифицировать новые сложные гетерозиготные мутации в STIL. Мутации лежат, соответственно, во взаимодействующих доменах CPAP / CENPJ и hsSAS6 STIL.Синхронизированные с M-фазой амниоциты от обоих пораженных плодов не показали отклоняющегося числа центриолей, как показано ранее для клеток с истощением или сверхэкспрессией STIL. Однако мы наблюдали удлинение по крайней мере на 1 центриоль для каждой дублированной центросомы. Эти предварительные результаты могут указывать на новый механизм, вызывающий MCPH и эмбриональную летальность у людей.

© 2017 S. Karger AG, Базель

Аутосомно-рецессивная первичная микроцефалия (MCPH) определяется как затылочно-лобная окружность головы (OFC) при рождении, уменьшенная как минимум на 2-3 SD ниже среднего значения по сравнению с контрольной группой, соответствующей возрасту, полу и этнической принадлежности, которая характеризуется пренатальным началом и более медленный, чем в среднем, рост ОФК после рождения [Mahmood et al., 2011; Моррис-Розендаль и Кайндл, 2015]. Некоторые пациенты с MCPH могут демонстрировать упрощенный круговой паттерн коры головного мозга, но архитектура мозга, как правило, не изменяется. Различные особенности, наблюдаемые у пациентов с MCPH, включают когнитивные нарушения — от легких до тяжелых — снижение роста и краниосиностоз [Mahmood et al. , 2011; Барбеленн и Цанг, 2014; Verloes et al., 2017]. В настоящее время (по состоянию на апрель 2017 г.) OMIM перечисляет 17 генов, связанных с MCPH. Неудивительно, что некоторые из этих генов кодируют белки, которые локализуются в центросоме или полюсе митотического веретена ( CPAP / CENPJ , STIL , CEP135 , CEP152 и SASS6 ), подчеркивая важность центросома для правильного деления клеток, особенно во время раннего нейрогенеза, когда время и симметрия деления клеток-предшественников строго регулируются [Paridaen and Huttner, 2014; Hardwick et al., 2015]. В целом, гены, вызывающие MCPH, участвуют в регуляции дупликации центриолей, позиционирования веретена и прикрепления кинетохор для правильной сегрегации хромосом в митозе, а также в поддержании стабильности генома через пути ответа на восстановление повреждений ДНК [Alcantara and O’Driscoll, 2014; Моррис-Розендаль и Кайндл, 2015]. Более того, в последние годы стало ясно, что MCPH имеет как генетическое, так и клиническое совпадение с другими нарушениями развития нервной системы, такими как синдром Зекеля, синдром Мейера-Горлина и первичная микроцефальная карликовость. Например, двуаллельные дефекты генов CPAP / CENPJ и CEP152 были связаны как с MCPH, так и с синдромом Секкеля [Bond et al., 2005; Аль-Досари и др., 2010; Гернси и др., 2010; Kalay et al., 2011], мутации CENPE в отношении MCPH и микроцефальной примордиальной карликовости [Mirzaa et al., 2014], в то время как мутации STIL были обнаружены как у пациентов с MCPH, так и с голопроэнцефалией (HPE) [Kumar et al. , 2009; Какар и др., 2015; Mouden et al., 2015], что привело к выводу, что эту группу расстройств можно рассматривать как клинический континуум, а не как отдельные сущности [Barbelanne and Tsang, 2014; Моррис-Розендаль и Кайндл, 2015].

В последние годы внедрение массового параллельного секвенирования как в исследованиях, так и в медицинской практике внесло значительный вклад в ускорение идентификации генов, связанных с заболеванием, особенно для редких и клинически гетерогенных менделевских расстройств [Gilissen et al., 2011; Диксон-Салазар и др. , 2012; Need et al., 2012; Rabbani et al., 2012, 2014; Ян и др., 2013, 2014; Wang et al., 2014]. Хотя интерпретация клинического значения и патогенности вариантов, идентифицированных с помощью полного экзома (WES) / секвенирования генома, часто является сложной задачей [Richards et al., 2015; Amendola et al., 2016], эти технологии позволили исследователям определить основные процессы развития и молекулярные процессы, нарушенные при многих нарушениях развития нервной системы, улучшив клиническое ведение, а также генетическое консультирование [Green and Guyer, 2011; Soden et al., 2014; Моррис-Розендаль и Кайндл, 2015].

Здесь мы сообщаем о семье с множественными выкидышами и двумя прерываниями беременности из-за глубокой микроцефалии плода (MC), связанной с замедленной гирификацией и дисгенезией мозолистого тела.WES позволил идентифицировать новые сложные гетерозиготные мутации в STIL .

Поскольку избыточная экспрессия и истощение STIL приводят, соответственно, к избыточному образованию и потере центриолей [Kitagawa et al. , 2011; Тан и др., 2011; Vulprecht et al., 2012; Arquint and Nigg, 2014], мы искали аналогичные аномалии в амниоцитах пораженных плодов. Удивительно, но при функциональном тестировании не наблюдалось центриолярного истощения или амплификации. Однако мы обнаружили значительное удлинение по крайней мере 1 центриоли в каждой центросоме в клетках пациентов.Поскольку варианты расположены во взаимодействующих доменах CPAP / CENPJ и hsSAS6, соответственно, эти результаты могут указывать на новый механизм, вызывающий болезнь, а именно на удлинение центриоли.

История болезни

Эта здоровая некровная пара была направлена ​​в наш специализированный центр на 21 неделе беременности из-за подозрения на МК. После 5 выкидышей в первом триместре у пары родились здоровая дочь и здоровый сын (рис. 1). 5 самопроизвольных выкидышей произошли между 7 и 11 неделями беременности.Хромосомные причины повторных выкидышей были исключены у обоих родителей. 8-я беременность наступила после индукции овуляции цитратом кломифена. Измерения ультразвуковой биометрии плода были в пределах гестационного возраста (21 неделя после менструального цикла), но OFC и бипариетальный диаметр были значительно ниже 3-го перцентиля [157,6 мм (нормальный: 176 ± 20 мм) и 42,8 мм (нормальный: 49 ± 5). 4 мм) соответственно]. В сагиттальной плоскости скошенный лоб подтвержден МС (рис. 2А). Расширенная нейросонография плода показала нормальную форму, но небольшой мозжечок (3-й перцентиль) и нормальный червь (7.7 мм). Половина септи пеллюциди присутствовала, но выглядела очень маленькой. Извилины развиты слабо, бороздки отсутствуют (рис. 2Б). Мозолистое тело выглядело коротким и толстым (11 мм), что позволяет предположить диагноз частичной агенезии мозолистого тела с патологическим сосудистым паттерном периклозальной артерии (рис. 2С). Проведен амниоцентез и выявлен нормальный молекулярный кариотип плода. Анализ мутаций ARX также был нормальным. После многопрофильного консультирования пара решила прервать беременность на 25 неделе беременности. Патологическое исследование плода мужского пола не выявило дополнительных внешних или внутренних макроскопических или микроскопических аномалий.

Рис. 1

Родословная семьи. WES проводился для пациентов I-1, I-2, II-8 и II-9. Секвенирование по Сэнгеру показало, что II-6 и II-7 унаследовали материнский вариант p.His411Asp. WT, дикий тип.

Рис. 2

Пренатальная визуализация головного мозга обоих пораженных плодов. A- C Ультразвуковое исследование второго триместра первого пораженного плода (II-8). A Сагиттальная плоскость, показывающая скошенный лоб, указывающий на микроцефалию (стрелка). B Увеличенная нейросонограмма, показывающая плохо развитые извилины и отсутствие борозд (стрелка). C Сагиттальная плоскость показывает короткое мозолистое тело с отсутствующей селезенкой и аберрантным ходом периклозальной артерии, показанным стрелками. D , E Сканирование второго триместра второго пораженного плода (II-9). D Сагиттальная плоскость, показывающая скошенный лоб, указывающий на микроцефалию (стрелка). E МРТ плода, подтверждающая задержку вращения в гестационном возрасте. Дисгенезия мозолистого тела показана на среднесагиттальной проекции (стрелка).

Через год пациентка снова забеременела, без дополнительного лечения. Ультразвуковое исследование во втором триместре (через 20 недель после менструального цикла) выявило МК с скошенным лбом плода (рис. 2D). Бипариетальный диаметр составлял 44,2 мм (в норме: 47 ± 3,5 мм), а OFC — 164,9 мм (в норме: 170 ± 20 мм), оба ниже 3-го процентиля, но все другие измерения соответствовали гестационному возрасту.Небольшая полость septi pellucidi была связана с коротким мозолистым телом (<3-го процентиля) из-за отсутствия звездочки [Malinger et al., 2012]. Дальнейшая оценка подтвердила аномальное развитие коры с уплощением островка, отсутствием латеральной медианы и латеральных теменно-затылочных борозд, а также пахигирией. МРТ плода подтвердила результаты ультразвукового исследования (рис. 2E). И снова пара предпочла прервать беременность. Из-за автолиза патологическое исследование головного мозга плода не представлялось возможным.

Материалы и методы

Подготовка библиотеки, обогащение экзома и массовое параллельное секвенирование

Сначала 200 нг геномной ДНК на каждого человека были количественно определены с использованием набора Qubit® dsDNA Broad Range Assay kit на флуориметре Qubit (Thermo Fisher Scientific Inc.) . Геномную ДНК фрагментировали с помощью ультразвукового аппарата Covaris M220 (Covaris, Woburn). Библиотеки секвенирования были подготовлены в соответствии с системой обогащения мишеней SureSelect ^XT для парного секвенирования Illumina, версия B1, декабрь 2014 г. (Agilent Technologies).Затем для обогащения экзома использовали панель конституциональных исследований OneSeq в соответствии со спецификацией производителя (Agilent Technologies). Качество срезанной ДНК, полногеномных и обогащенных экзомами библиотек оценивали с помощью чипов Agilent DNA 1000 или ДНК High Sensitivity, запускаемых на приборе Agilent 2100 Bioanalyzer. Затем образцы секвенировали на аппарате Illumina HiSeq2500 в быстром режиме с использованием протокола парных концов 2 × 100 п.н. Мы получили в среднем 88-кратное обогащение целевой области, среднее 30-кратное покрытие 93% и 10-кратное покрытие 97%.Считанные последовательности выравнивали с эталонной последовательностью генома человека (сборка генома GRCh47 / hg19) с помощью выравнивателя Берроуза-Уиллера (версия BWA 0.7.8). SAMtools (версия 0.1.19) использовались для преобразования файлов SAM в BAM, сортировки и выравнивания индексации. Инструменты Picard (версия 1.118) использовались для вычисления показателей качества и отметки дубликатов, созданных методом ПЦР. Программный пакет Genome Analysis Toolkit (GATK, версия 3.2.2) использовался для выполнения локального выравнивания вокруг отступов и повторной калибровки базовой оценки качества.SNP и небольшие индели вызывались с помощью GATK HaplotypeCaller (версия 3.2.2). Аннотации вариантов выполнялись с помощью ANNOVAR (версия 11-0882013), включая наборы данных из dbSNP137, NHLBI 6500 Exome (версия октябрь 2012 г. ) и 1000 Genomes Projects (версия апреля 2012 г.) для частот вариантов, изменения аминокислот, функциональных прогнозов из SIFT. , Polyphen2, LRT, MutationTaster, PhyloP и GERP ⁺⁺ оценки сохранения.

Фильтрация вариантов и проверка последовательности по Сэнгеру

Фильтрация на основе трио всех аннотированных вариантов, собранных в файле Excel, была проведена вручную в соответствии с несколькими шаблонами наследования с использованием прогнозов генотипа, созданных с помощью инструмента GATK UnifiedGenotyper (гомозиготный рецессивный, составной гетерозиготный, гемизиготный, de novo совместно с пораженными плодами).Аннотации на основе «knownGene» использовались для дальнейшей фильтрации: сохранялись только экзонические, сплайсинговые и несинонимичные варианты. Были сохранены только варианты, полностью отсутствующие или с частотой минорных аллелей (MAF) <1% в 1000 Genomes Project, ESP6500si_ALL и dbSNP137. Варианты-кандидаты дополнительно исследовались вручную в базе данных ExAC (http://exac. broadinstitute.org/), Kaviar (http://db.systemsbiology.net/kaviar/cgi-pub/Kaviar.pl), в обновленных версиях. вышеупомянутых баз данных (1000 Genomes Phase 3, ESP6500SI-V2 и dbSNP147), а также разработанным собственными силами программным обеспечением NGS-Logistic (https: // ngsl.esat.kuleuven.be/), в котором собраны анонимные данные секвенирования экзома, полученные в 5 бельгийских центрах генетики человека [Ardeshirdavani et al., 2014]. Анализ сегрегации был проведен у всех живых членов семьи, включая 2 здоровых братьев и сестер, с помощью стандартного капиллярного электрофореза. Праймеры для секвенирования были разработаны с помощью веб-приложения Primer3 (http://primer3.ut.ee/): для праймеров варианта p.His411Asp FWD 5′-AGTTGTGTGTCTTGGGTAGGTA-3 ‘и REV 5′-AGCTTCCCTGGTCAACTAACA-3′; для праймеров варианта p.Met1124Val FWD 5’-AAGGCTCTTTCTGACCACCA-3 ‘и REV 5′-AGTGTGTTGGCATGCATCAG-3’.Продукты ПЦР очищали с использованием ExoSAP-IT® PCR Product Cleanup (Affymetrix) и реакций секвенирования по Сэнгеру, выполняемых с помощью химического анализа BigDye® Terminator v3. 1 (Thermo Fisher Scientific Inc.), после двунаправленного секвенирования ДНК с помощью генетического анализатора ABI 3500 Series ( Applied Biosystems®). Регистрационные номера GenBank NM_001048166.1 и NP_001041631.1 использовались повсюду в статье для человека STIL . Описанные здесь варианты были отправлены в общую установку LOVD 3.0 (индивидуальный 00089033, варианты 0000147090 и 0000147091).

Иммунофлуоресценция и микроскопия, подсчет центриолей и измерение длины

Амниоциты плода от пораженного плода и от здорового контроля (инвазивное тестирование проводится для пожилого возраста матери и тревожности, результат пренатального анализа, arr (1-22) × 2, (XY) ) × 1), выращивали на покровных стеклах в AmnioMAX ™ C-100 Basal Medium + Supplement (Gibco ™) при 37 ° C и 5% CO ₂ . При 70% конфлюэнтности клетки предварительно синхронизировали в течение 24 часов в среде, содержащей 2 мМ тимидин, которая блокирует синтез ДНК, останавливая клетки в фазе G1 / S.После отмывки тимидином среду, содержащую STLC (7,5 мкМ), добавляли для остановки клеток в прометафазе и клетки инкубировали в течение ночи. Перед фиксацией клетки высвобождали в нормальной среде в течение 2 ч. Затем клетки фиксировали в ледяном метаноле при -20 ° C в течение 10 минут с последующей промывкой 3 × 1% PBS, пермеабилизацией в 0,2% PBST (0,2% Tween-20 в 1% PBS) в течение 5 минут, 3 × 1. % Промывка PBS, 30-минутная инкубация в блокирующем буфере (5% BSA / PBS + 0,1% Tween-20) при комнатной температуре, 1-часовая инкубация при комнатной температуре в блокирующем буфере, содержащем 1: 500 первичного кроличьего анти-центрина-2 антитела (sc-27793-R, Santa Cruz Biotechnology).После промывки 3 × 1% PBS клетки инкубировали в блокирующем буфере, содержащем разведение 1: 1000 вторичных антител (козлиное анти-кроличье антитело Alexa Fluor® 488, Invitrogen) в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем 3 × 1. % Отмывка PBS и 15-минутная инкубация в 1% PBS, содержащем DAPI (1:10 000). Затем окрашенные покровные стекла закрепляли с помощью Mowiol® 4-88 (Sigma-Aldrich). Конфокальные изображения были получены с помощью конфокальной системы лазерного сканирования Leica TCS SPE, установленной на микроскопе Leica DMI 4000B и оснащенной Zeiss Plan Apochromat 63x 1. Масляный объектив DIC 40NA. Оптические срезы получали каждые 0,17 мкм. Изображения обрабатывались с помощью программного обеспечения ImageJ с использованием функции 3D-проекта без интерполяции и расстояния между срезами 0,1 мкм для поворота изображений и определения длины CETN2-положительных фокусов.

Статистические методы

Пакет инструментов XLSTAT (Addinsoft) использовался для расчета одностороннего дисперсионного анализа и тестов Таки и Даннета для параметрических множественных сравнений средней длины CETN2-положительных очагов; k-пропорции и тесты Монте-Карло были использованы для определения различий в пропорциях числа центриолей, наблюдаемых в митотических амниоцитах.Для всех тестов использовались настройки по умолчанию.

Результаты

Сложные гетерозиготные мутации STIL являются вероятной причиной микроцефалии плода

Мы выполнили WES на геномной ДНК как пораженных плодов, так и родителей (рис. 1; индивидуумы I-1, I-2, II-8 и II-9). Поскольку пара пережила несколько выкидышей, мы выдвинули гипотезу о гомозиготном или комбинированном гетерозиготном рецессивном наследовании. Поскольку оба плода были мужскими, мы одинаково искали варианты, унаследованные от матери, сцепленные с Х-хромосомой, но не идентифицировали никаких возможных патогенных / повреждающих кандидатов (онлайн-приложение.Таблица 1; см. www.karger.com/doi/10.1159/000479666 для всех доп. материал). Также отсутствовали предполагаемые варианты de novo, общие для пораженных плодов, за исключением родительского зародышевого мозаицизма как возможного механизма [Poirier et al., 2013; Zillhardt et al., 2016]. После фильтрации гомозиготных редких вариантов кодирования обнаружено не было. Впоследствии мы отфильтровали наличие редких сложных гетерозиготных мутаций, что привело к 4 потенциальным генам-кандидатам ( ALDh5A1 , STIL , TTN и VWF ; онлайн-поставка.Таблица 2). Миссенс-варианты, идентифицированные в STIL (c.C1231G; p.His411Asp, наследуется от матери и c.A3370G; p.Met1124Val, наследуется от отца), по прогнозам наиболее часто используемых программ для прогнозирования, повреждают наиболее часто используемые программы прогнозирования и включают сильно ограниченные аминокислоты, как обозначается GERP ⁺⁺ баллами (5,05 и 4,99, соответственно). Трансверсия C> G, приводящая к p.His411Asp, отсутствует во всех опрошенных базах данных популяционной генетики (dbSNP147, 1000 Genomes, Exome Variant Server, ExAC и Kaviar), в то время как трансверсия C> A в том же положении, ведущая к p.His411Asn (rs746778024) присутствует в dbSNP147 и ExAC с MAF 0,00002 (2/121298 аллелей). Вариант p.Met1124Val находится в dbSNP147 (rs776799930) и был идентифицирован в проекте UK10K с MAF 0,000013. Секвенирование по Сэнгеру подтвердило наличие обоих вариантов у плодов, а также гетерозиготное состояние у обоих родителей и показало, что 2 незатронутых брата и сестры несли материнский вариант p.His411Asp.

STIL представляет собой центросомный белок, участвующий в поддержании целостности центросом, организации митотического веретена и позиционировании [Pfaff et al., 2007; Castiel et al., 2011; Китагава и др., 2011; Vulprecht et al., 2012]. Наиболее важно то, что он представляет собой ключевой фактор, необходимый для правильной дупликации центриолей [Stevens et al. , 2010; Arquint et al., 2012]. Мутации в STIL связаны с MCPH7 у людей (OMIM 612703) [Kumar et al., 2009], тогда как удаление Stil (ранее Sil ) — мышиного ортолога STIL — вызывает летальность в середине беременности. с выраженной задержкой роста, выраженными дефектами средней линии нервной трубки и рандомизированной осевой асимметрией из-за нарушенной реакции на передачу сигналов Shh [Израэли и др., 1999, 2001; Дэвид и др., 2014]. У рыбок данио stil (ранее sil ) гомозиготный мутант cassiopeia ( csp ) с потерей функции также проявляет эмбриональные летальные дефекты с повышенным числом митотических клеток, демонстрирующих дезорганизованные митотические веретена, часто лишенные одной или обеих центросом [ Pfaff et al., 2007]. Мы пришли к выводу, что составные гетерозиготные мутации STIL , обнаруженные WES у пораженных плодов, вызывают серьезные дефекты развития нервной системы, наблюдаемые при ультразвуковом исследовании и МРТ плода, что, возможно, также приводит к повторным выкидышам у пары.

Мутации STIL вызывают удлинение центриолей

В свете тяжелого фенотипа, обнаруженного у пораженных плодов, мы предположили, что сложные гетерозиготные мутации STIL будут мутациями потери функции и будут повторять истощение STIL, которое блокирует дупликацию центриолей. [Китагава и др., 2011; Тан и др., 2011; Arquint et al., 2012; Vulprecht et al., 2012], что в данном случае может привести к гибели эмбрионов. Чтобы проверить эту гипотезу, мы провели иммунофлуоресцентные эксперименты с антителами против центрина-2 (CETN2), чтобы отметить центриолярные структуры в амниоцитах плода, синхронизированные в прометафазе с обратимым ингибитором KIF11 STLC (S-тритил-L-цистеином).STLC блокирует разделение дуплицированных центросом и образование биполярного веретена без нарушения самой дупликации центриолей [Skoufias et al., 2006]. Контрольные и затронутые митотические амниоциты (6089_control, n = 58; 6047_affected [II-8], n = 80; 6056_affected [II-9], n = 20) оценивали в иммунофлуоресцентном эксперименте, проведенном в двух экземплярах ( Рис. 3A). Удивительно, но аномальное количество центриолей в пораженных амниоцитах плода не наблюдалось по сравнению с контролем (рис.3B), подразумевая, что мутации, обнаруженные у плодов, не имели гипотетического нулевого эффекта и не имитировали образование множественных центриолей, наблюдаемое в более ранних экспериментах по сверхэкспрессии [Tang et al., 2011; Arquint et al., 2012]. Однако, глядя на трехмерную проекцию, мы отметили, что по крайней мере одна центриоль на дублированную центросому оказалась длиннее в пораженных амниоцитах по сравнению с контрольными амниоцитами плода. Для количественной оценки этого наблюдения было измерено расстояние между первым и последним флуоресцентным CETN2-положительным стеком в процентах центриолей, которое использовалось в качестве индикатора длины центриоли.Среднюю длину самой длинной центриоли каждой центросомы (обозначенной как «большая центриоль» или MACe) сравнивали со средней длиной самых коротких центриолей (определяемой как «второстепенная центриоль» или MiCe). Средние длины MiCe в пораженных и контрольных митотических амниоцитах были статистически равными (односторонний тест ANOVA p = 0,25; тесты попарного сравнения, несущественные; онлайн-приложение, таблица 3A). Средняя длина контрольного MACe значительно отличается как от затронутых, так и от контрольных значений MiCe (односторонний тест ANOVA p <0.0001, достоверность подтверждена тестами попарного сравнения; онлайн-поставка. Таблица 3C). Поскольку предыдущие исследования с помощью электронной микроскопии показали, что дочерние центриоли обычно составляют около 80% длины матери [Chrétien et al., 1997; Азимзаде и Борненс, 2007; Узбеков и др., 2012], можно предположить, что по крайней мере для контрольных амниоцитов MiCe и MACe представляют дочерние и материнские центриоли соответственно. С другой стороны, средняя длина затронутых MACe была значительно выше, чем в контрольных ячейках (односторонний тест ANOVA p <0.0001, подтвержденное тестами попарного сравнения, фиг. 3C; онлайн-поставка. Таблица 3B). Средняя длина MACe амниоцитов обоих пораженных плодов находится далеко за пределами диапазона погрешности измерения, что делает эти значения значительно отличающимися от всех MiCes и контрольных MACe .

Рис. 3

Пораженные амниоциты плода не обнаруживают аберрантного количества CETN2-положительных очагов в митозе, но по крайней мере одну удлиненную центриоль на центросому. A Конфокальные изображения контрольных и пораженных митотических амниоцитов, окрашенных антителами против CETN2 (зеленый).Тонкие стрелки представляют второстепенные центриоли (MiCes), а толстые стрелки — большие центриоли (MACes) . B Число CETN2-положительных очагов в пораженных и непораженных митотических амниоцитах. Тест K-пропорций p Отображаются значения , а незначимость была подтверждена методом Монте-Карло для низких значений (5000 имитаций, p значений не показаны). C Сравнение средней длины MACe и MiCe в пораженных и контрольных амниоцитах (MiCe 6089_control = 0. 38 ± 0,07 мкм; 6047_affected = 0,40 ± 0,05 мкм; 6056_affected = 0,39 ± 0,1 мкм; MACe 6089_control = 0,45 ± 0,07 мкм; 6047_affected = 0,72 ± 0,11 мкм; 6056_affected = 0,70 ± 0,12 мкм). Отображаются значения одностороннего дисперсионного анализа p (см. Онлайн-приложение в таблице 3 для парных сравнительных тестов между контрольными и затронутыми MiCes / MAC по отдельности).

Обсуждение

Ген STIL был первоначально идентифицирован посредством слитой кДНК в линии Т-клеточного лейкоза, возникшей в результате интерстициальной делеции между STIL и прилегающей 5′-UTR SCL , предполагаемым фактором гемопоэтической транскрипции [ Aplan et al., 1990]. Ген содержит 17 экзонов, кодирующих белок из 1288 аминокислот. Белок рекрутируется на проксимальном конце возникающих дочерних центриолей в начале дупликации центриолей вместе с фактором дупликации центриолей hsSAS-6 и регулятором длины центриолей CPAP / CENPJ [Tang et al., 2011]. Этот процесс управляется активностью фосфорилирования PLK4 [Holland et al. , 2010; Охта и др., 2014; Kratz et al., 2015; Мойер и др., 2015]. Когда происходит дупликация центриоли, Cdk1 запускает транслокацию STIL из центросомы в цитоплазму, где он деградирует через путь комплекса, способствующего анафазе / циклосома-протеасома [Arquint and Nigg, 2014].Уровни STIL жестко регулируются во время клеточного цикла: уровень белка очень низкий в фазе G1, постепенно увеличивается во время и после перехода G1-S и, наконец, начинает снижаться во время перехода от метафазы к анафазе [Arquint et al., 2012 ]. В то время как истощение STIL в клетках человека блокирует дупликацию центриолей, избыточная экспрессия белка приводит к образованию множественных дочерних центриолей вокруг одной материнской центриоли [Kitagawa et al., 2011; Тан и др., 2011; Arquint et al., 2012; Arquint and Nigg, 2014], фенотип, напоминающий фенотип, наблюдаемый для сверхэкспрессии как hsSAS-6, так и PLK4 [Habedanck et al., 2005; Leidel et al., 2005; Kleylein-Sohn et al., 2007; Пил и др., 2007; Родригес-Мартинс и др. , 2007; Стрнад и др., 2007; Кунья-Феррейра и др., 2009; Роджерс и др., 2009; Marthiens et al., 2013; Коэльо и др., 2015]. Интересно, что мутации в PLK4 были связаны с примордиальной карликовостью и ретинопатией / хориоретинопатией, таким образом расширяя клинический спектр, связанный с дефектами центриолей [Martin et al., 2014; Шахин и др., 2014; Цуцуми и др., 2016].

Впервые Kumar et al. [2009] сообщили о связи между гомозиготными мутациями в STIL и аутосомно-рецессивными первичными MC. В этом исследовании 3 гомозиготные усекающие мутации в STIL были идентифицированы у членов 4 индийских семей, затронутых MCPH, полученных от кровных браков. Впоследствии были описаны несколько других семейств (обзор на рис. 4; таблица 1), и, помимо MC, часто наблюдались другие аномалии мозга, включая упрощенный круговой паттерн, уменьшение белого вещества, аномальное мозолистое тело и долевую HPE [Kumar и другие., 2009; Bennett et al., 2014; Какар и др., 2015; Mouden et al. , 2015]. Аномалии развития ЦНС плода, вызванные составными гетерозиготными мутациями STIL , были описаны в одном предыдущем исследовании, в котором MC плода наблюдали на 20-й неделе беременности с помощью ультразвукового исследования [Bennett et al., 2014]. В этом случае МРТ, выполненная на 31 неделе беременности, выявила тяжелые MC и аномалии, соответствующие HPE. Однако постнатальная визуализация того же случая показала большую симметричную двустороннюю шизэнцефалию или гидранэнцефалию с лежащими в основе миграционными аномалиями, а не HPE.5 выкидышей, произошедших в нашей семье, могут указывать на причинную связь между мутациями STIL и эмбриональной летальностью у людей. К сожалению, не было материала для ретроспективного генетического тестирования. Несмотря на это, вариабельность фенотипа наблюдается у людей с одинаковыми мутациями STIL [например, Kakar et al., 2015; Mouden et al., 2015] (Таблица 1) позволяет предположить, что более серьезные пороки развития головного мозга могли иметь место во время предыдущих беременностей.

Таблица 1

Сводка зарегистрированных семейств с мутациями в STIL

Рис. 4

Схема мутаций STIL , описанных на данный момент, белковых доменов и PLK4-зависимых фосфорилированных сайтов. A На схеме изображены домены связывания CPAP / CENPJ (аминокислоты 391-435), связывания PLK4 (CC-мотив, аминокислоты 721-747) и связывания hsSAS6 (мотив STAN, аминокислоты 1052–1148). KEN-бокс (аминокислоты 1,244-1,246) на С-конце белка запускает APC / C-опосредованную деградацию STIL [Arquint et al., 2012]. Ниже приводится обзор мутаций, описанных на сегодняшний день, с их ссылками, а также новых мутаций, описанных в этом отчете (курсивом). B Выравнивание последовательностей Danio rerio и Homo sapiens CPAP-связывающего домена STIL. Мутация p.His411Asp лежит внутри консервативного мотива PRxxPxP, ответственного за взаимодействие между STIL и TCP-доменом CPAP [Cottee et al., 2013].

Выявленная здесь мутация STIL p. His411Asp расположена в богатом пролином CPAP / CENPJ-взаимодействующем домене белка (рис.4), который также, как было показано, отвечает за большую часть связывающей активности с CPAP / CENPJ [Cottee et al., 2013]. Скрининг дрожжевых 2-гибридов показал, что участок CP3 человеческого белка CPAP / CENPJ (остатки 895–1338) взаимодействует с участком STIL между аминокислотами 231–619 [Tang et al., 2011], этот интервал еще более сузился Котти. и другие. [2013] к остаткам STIL 391-435. Интересно, что гомозиготная миссенс-мутация CPAP / CENPJ p.Glu1235Val, обнаруженная у лиц с MCPH6 [Bond et al., 2005], как было показано, значительно мешает связыванию с STIL, подтверждая гипотезу о том, что аберрантное взаимодействие между STIL и CPAP / CENPJ может быть возможным механизмом MCPH у людей [Tang et al., 2011; Hatzopoulos et al., 2013]. Более того, систематический вычислительный анализ структурных последствий нескольких миссенс-полиморфизмов STIL выявил rs147744459 (p.Arg242Cys) как очень опасный несинонимичный SNP, связанный с заболеванием. Несмотря на то, что он находится вне домена взаимодействия с CPAP / CENPJ, идентифицированного Cottee et al.[2013], молекулярно-динамическое моделирование показало радикальное изменение структуры белка STIL ^R242C , которое может быть ответственным за нарушение центросомной локализации CPAP / CENPJ [Kumar et al., 2012]. Интересно, что в сотрудничестве с CEP120 и SPICE1, CPAP / CENPJ контролирует удлинение процентриолей посредством своей активности связывания тубулина с димером, которая способствует полимеризации центриолярных микротрубочек [Comartin et al., 2013; Lin et al., 2013]. Истощение любого из этих белков приводит к более коротким дочерним центриолям [Comartin et al., 2013]. Напротив, сверхэкспрессия либо CPAP / CENPJ, либо CEP120 индуцирует сборку чрезмерно длинных центриолей, от которых отходят атипичные лишние центриоли [Kohlmaier et al., 2009; Schmidt et al., 2009; Тан и др., 2009; Комартин и др., 2013; Lin et al., 2013]. Такие же результаты наблюдались для истощения концевого белка CP110, который обычно локализуется на дистальных концах как родительских, так и дочерних центриолей [Kleylein-Sohn et al. , 2007; Schmidt et al., 2009].Недавно было получено больше информации о регуляции длины центриоли с идентификацией N-концевого LID-элемента CPAP / CENPJ, который действует как колпачок, который стерически блокирует добавление тубулина к дистальному концу центриоли, таким образом контролируя размер органелл и обеспечивая исключительно медленная скорость роста центриолярных микротрубочек по сравнению с их цитоплазматическими аналогами [Sharma et al., 2016].

Вторая гетерозиготная мутация находится внутри С-концевого домена STAN (STil / ANa2) белка (рис.4). Этот консервативный мотив (остатки 1052–1148) отвечает за взаимодействие между STIL и центриолярным белком hsSAS6, событие, которому способствует PLK4-фосфорилирование 7 Ser-Thr, локализованного в одном домене и вокруг него. Это событие необходимо для рекрутирования и центриолярного нацеливания hsSAS6 и инициации сборки процентриолей [Stevens et al., 2010; Джинджев и др., 2014; Охта и др., 2014]. Помимо фосфорилирования STIL, PLK4 связывается непосредственно со своим CC-доменом (остатки 721-747), что позволяет ему рекрутировать центриоли в начале дупликации центриолей [Ohta et al. , 2014]. Изменение p.Met1124Val, обнаруженное в этом исследовании, приводит к поддержанию гидрофобной боковой цепи, но эта замена может либо предотвратить PLK4-зависимое фосфорилирование окружающих остатков, либо стерически препятствовать взаимодействию между STIL и hsSAS6, что в обоих случаях приводит к неправильный набор последних в месте сборки процентриолей. Альтернативно, поскольку hsSAS6 обладает внутренней активностью, способствующей сборке микротрубочек, опосредованной его C-концевым доменом [Gupta et al., 2015], мутация p.Met1124Val может способствовать стабилизации hsSAS6, приводя к чрезмерному удлинению процентриолярных микротрубочек.

Трудно предположить, как удлиненные центриоли могут приводить к МС. Удлинение центриолей также наблюдается при синдроме OFD1 [оро-лицевой-цифровой синдром 1 (OFDS1; OMIM 311200)], Х-сцепленной цилиопатии, характеризующейся пороками развития лица, ротовой полости и пальцев [Ferrante et al., 2001; Thauvin-Robinet et al., 2005]. Кроме того, это заболевание может сопровождаться различными пороками развития ЦНС и MC [Gurrieri et al. , 2007]. OFD1 ассоциирует с дистальными концами центриолярных микротрубочек, ограничивает удлинение материнских и дочерних центриолей и необходим для формирования дистальных придатков и ресничек. Было показано, что ряд связанных с заболеванием мутаций OFD1 снижает способность белка сдерживать удлинение дистальной части центриолей, что приводит к аномально длинным центриолям матери и дочери [Singla et al., 2010]. Эти дефекты неблагоприятно влияют на продолжительность различных фаз клеточного цикла, который особенно короток у быстро делящихся нейральных предшественников, внося вклад в патогенез корковых аномалий и MC [Alcantara and O’Driscoll, 2014].Мы предполагаем, что в нашем случае нарушение нормальной регуляции удлинения центриолей могло иметь аналогичный эффект. Определенно необходимы дальнейшие функциональные исследования того, как мутации миссенс STIL , расположенные в связывающих доменах белка, влияют на регуляцию удлинения центриолей и на взаимодействие с другими центриолярными белками, чтобы полностью понять молекулярные механизмы, связывающие удлинение центриоли с патогенезом сложного мозга. порок развития и MC.

Благодарности

Мы хотим поблагодарить членов семьи, участвовавших в этом исследовании. Вторичные антитела Alexa Fluor® были подарком профессора Матье Боллена (Лаборатория биосигналов и терапии, Департамент клеточной и молекулярной медицины, KUL, Бельгия). Мы также хотели бы поблагодарить Софи Де Мюнтер (Лаборатория биосигналов и терапии) за помощь в оптимизации иммунофлуоресценции и настройках конфокального микроскопа. F.C. соискатель PhD и H.V.E. является клиническим исследователем Исследовательского фонда Фландрии (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek, FWO, Бельгия).Работа поддержана грантами KUL PFV / 10/016 SymBioSys компании J.R.V. и GOA / 12/015, J.R.V. и H.V.E., а также программа «Межуниверситетские полюса притяжения» Бельгийского управления научной политики (BELSPO-IAP) (проект IAP P7 / 43-BeMGI).

Заявление об этике

Протокол WES был одобрен Наблюдательным советом университетских больниц Лёвена, и до процедуры было получено информированное согласие родителей.

Заявление о раскрытии информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Список литературы

1. Алькантара Д, О’Дрисколл М: Врожденная микроцефалия. Am J Med Genet Часть C Semin Med Genet 166: 124-139 (2014).
2. Al-Dosari MS, Shaheen R, Colak D, Alkuraya FS: Novel Мутация CENPJ вызывает синдром Секеля.J Med Genet 47: 411-414 (2010).
3. Амендола Л. М., Джарвик Г.П., Лео М.К., Маклафлин Х.М., Аккари Ю. и др.: Выполнение рекомендаций по интерпретации вариантов ACMG-AMP в девяти лабораториях Консорциума исследовательских исследований клинического секвенирования. Am J Hum Genet 98: 1067-1076 (2016).
4. Аплан П.Д., Ломбарди Д.П., Гинзберг А.М., Коссман Дж., Бертнесс В.Л., Кирш И.Р.: Нарушение локуса SCL человека «незаконной» активностью рекомбиназы V- (D) -J. Science 250: 1426-1429 (1990).
5. Ардеширдавани А., Суш Э., Дехасп Л., Ван Хоудт Дж., Вермиш Дж. Р., Моро Ю.: Логистика NGS: объединенный анализ вариантов последовательности NGS в нескольких местах.Геном Мед 6:71 (2014).
6. Arquint C, Nigg EA: Мутации микроцефалии STIL мешают APC / C-опосредованной деградации и вызывают амплификацию центриолей. Curr Biol 24: 351-360 (2014).
7. Arquint C, Sonnen KF, Stierhof YD, Nigg EA: Регулируемая клеточным циклом экспрессия STIL контролирует количество центриолей в клетках человека.J Cell Sci 125: 1342-1352 (2012).
8. Азимзаде Дж., Борненс М: Структура и дупликация центросомы. J Cell Sci 120: 2139-2142 (2007).
9. Barbelanne M, Tsang WY: Молекулярная и клеточная основа аутосомно-рецессивной первичной микроцефалии. Biomed Res Int 2014: 547986 (2014).
10. Беннетт Х., Прести А., Адамс Д., Риос Дж., Бенито С., Коэн Д.: Пренатальная картина тяжелой микроцефалии и аномалий мозга у пациента с новыми составными гетерозиготными мутациями в гене STIL , обнаруженными постнатально с помощью анализа экзома.Pediatr Neurol 51: 434-436 (2014).
11. Бонд Дж., Робертс Э., Спрингелл К., Лизаррага С.Б., Скотт С. и др.: Центросомный механизм с участием CDK5RAP2 и CENPJ контролирует размер мозга. Нат Генет 37: 353-355 (2005).
12. Castiel A, Danieli MM, David A, Moshkovitz S, Aplan PD и др. : Белок Stil регулирует целостность центросом и митоз посредством подавления Chfr.J Cell Sci 124: 532-539 (2011).
13. Chrétien D, Buendia B, Fuller SD, Karsenti E: Реконструкция центросомного цикла из криоэлектронных микрофотографий. J. Struct Biol 120: 117-133 (1997).
14. Coelho PA, Bury L, Shahbazi MN, Liakath-Ali K, Tate PH и др.: Сверхэкспрессия Plk4 вызывает амплификацию центросом, потерю первичных ресничек и связанную с ними гиперплазию тканей у мышей.Откройте Биол 5: 150209 (2015).
15. Comartin D, Gupta GD, Fussner E, Coyaud É, Hasegan M, et al: CEP120 и SPICE1 взаимодействуют с CPAP при удлинении центриолей. Curr Biol 23: 1360-1366 (2013).
16. Cottee MA, Muschalik N, Wong YL, Johnson CM, Johnson S, et al: Кристаллические структуры комплекса CPAP / STIL показывают его роль в сборке центриолей и микроцефалии человека.Элиф 2: e01071 (2013).
17. Cunha-Ferreira I, Rodrigues-Martins A, Bento I, Riparbelli M, Zhang W и др.: Убиквитинлигаза SCF / Slimb ограничивает амплификацию центросом за счет деградации SAK / PLK4. Curr Biol 19: 43-49 (2009).
18. Дарвиш Х. , Эсмаили-Ние С., Монаджеми Г., Мохсени М., Гасеми-Фирузабади С. и др.: Клиническое и молекулярно-генетическое исследование 112 иранских семей с первичной микроцефалией.J Med Genet 47: 823-828 (2010).
19. Дэвид А., Лю Ф., Тибелиус А., Вулпрехт Дж, Вальд Д. и др.: Отсутствие центриолей и первичных ресничек у эмбрионов мышей STIL- ^/. Cell Cycle 13: 2859-2868 (2014).
20. Диксон-Салазар Т., Силхави Дж., Удпа Н., Шрот Дж., Биелас С. и др.: Секвенирование экзома может улучшить диагностику и изменить лечение пациентов.Sci Transl Med 4: 138ra78 (2012).
21. Джинджев Н. С., Цоловски Г., Липински З., Шнайдер С., Латтао Р. и др.: Plk4 фосфорилирует Ana2, чтобы запустить рекрутирование Sas6 и образование процентриолов. Curr Biol 24: 2526-2532 (2014).
22. Ferrante MI, Giorgio G, Feather SA, Bulfone A, Wright V и др.: Идентификация гена орально-лицевого-цифрового синдрома I типа.Am J Hum Genet 68: 569-576 (2001).
23. Gilissen C, Hoischen A, Brunner HG, Veltman JA: Раскрытие Менделирующей болезни с помощью секвенирования экзома. Биология генома 12: 228 (2011).
24. Green ED, Guyer MS; Национальный исследовательский институт генома человека: Схема курса геномной медицины от пар оснований до постели больного. Nature 470: 204-213 (2011).
25. Guernsey DL, Jiang H, Hussin J, Arnold M, Bouyakdan K, et al: Мутации в центросомном белке CEP152 в семьях первичной микроцефалии, связанные с MCPh5. Am J Hum Genet 87: 40-51 (2010).
26. Гупта Х., Бадарудин Б., Джордж А., Томас Г.Е., Гириш К.К., Манна Т.К .: С-конец человеческого SAS-6 образует ядра и способствует сборке микротрубочек in vitro путем связывания с микротрубочками.Биохимия 54: 6413-6422 (2015).
27. Gurrieri F, Franco B, Toriello H, Neri G: Орально-лицевые-цифровые синдромы: обзор и диагностические рекомендации Am J Med Genet A 143A: 3314-3323 (2007).
28. Habedanck R, Stierhof YD, Wilkinson CJ, Nigg EA: Polo kinase Plk4 функционирует в дупликации центриолей.Nat Cell Biol 7: 1140-1146 (2005).
29. Hardwick LJ, Ali FR, Azzarelli R, Philpott A: Регулирование пролиферации клеточного цикла по сравнению с дифференцировкой в ​​центральной нервной системе. Cell Tissue Res 359: 187-200 (2015).
30. Hatzopoulos GN, Erat MC, Cutts E, Rogala KB, Slater LM, et al: Структурный анализ G-box домена белка микроцефалии CPAP предполагает его роль в архитектуре центриолей. Структура 21: 2069-2077 (2013).
31. Холланд AJ, Lan W, Niessen S, Hoover H, Cleveland DW: Активность киназы Polo-подобной киназы 4 ограничивает избыточную дублирование центросом, саморегулируя ее собственную стабильность. J Cell Biol 188: 191-198 (2010).
32. Израэли С., Лоу Л.А., Бертнесс В.Л., Гуд Д., Дорвард Д.В. и др.: Ген SIL необходим для осевого развития эмбриона мыши и спецификации слева направо.Nature 399: 691-694 (1999).
33. Израэли С. , Лоу Л.А., Бертнесс В.Л., Кампанер С., Хан Х. и др.: Генетические доказательства того, что Sil требуется для ответа Sonic Hedgehog. Бытие 31: 72-77 (2001).
34. Какар Н., Ахмад Дж., Моррис-Розендаль Д. Д., Альтмюллер Дж., Фридрих К. и др.: Мутация STIL вызывает аутосомно-рецессивную микроцефалическую долевую голопроэнцефалию.Hum Genet 134: 45-51 (2015).
35. Kalay E, Yigit G, Aslan Y, Brown KE, Pohl E, et al: CEP152 — это протеин поддержания генома, нарушенный при синдроме Секкеля. Нат Генет 43: 23-26 (2011).
36. Kitagawa D, Kohlmaier G, Keller D, Strnad P, Balestra FR, et al: Позиционирование веретена в клетках человека зависит от правильного образования центриолей и белков микроцефалии CPAP и STIL. J Cell Sci 124: 3884-3893 (2011).
37. Kleylein-Sohn J, Westendorf J, Le Clech M, Habedanck R, Stierhof YD, Nigg EA: Plk4-индуцированный биогенез центриолей в клетках человека. Dev Cell 13: 190-202 (2007).
38. Кольмайер Г., Лончарек Дж., Менг Х, МакИвен Б.Ф., Могенсен М.М. и др.: Слишком длинные центриоли и дефектное деление клеток при избытке белка CPAP, связанного с SAS-4.Curr Biol 19: 1012-1018 (2009).
39. Kratz AS, Bärenz F, Richter KT, Hoffmann I: Plk4-зависимое фосфорилирование STIL необходимо для дупликации центриолей. Biol Open 4: 370-377 (2015).
40. Kumar A, Girimaji SC, Duvvari MR, Blanton SH: Мутации в STIL , кодирующем перицентриолярный и центросомный белок, вызывают первичную микроцефалию.Am J Hum Genet 84: 286-290 (2009).
41. Кумар А., Раджендран В., Сетумадхаван Р., Пурохит Р.: Предсказание in silico связанного с заболеванием мутанта STIL и его влияния на рекрутирование центромерного белка J (CENPJ). FEBS Open Bio 2: 285-293 (2012).
42. Leidel S, Delattre M, Cerutti L, Baumer K, Gönczy P: SAS-6 определяет семейство белков, необходимых для дупликации центросом в C. elegans и в клетках человека. Nat Cell Biol 7: 115-125 (2005).
43. Lin YN, Wu CT, Lin YC, Hsu WB, Tang CJC и др.: CEP120 взаимодействует с CPAP и положительно регулирует удлинение центриоли. J Cell Biol 202: 211-219 (2013).
44. Махмуд С., Ахмад В., Хассан М.Дж .: Аутосомно-рецессивная первичная микроцефалия (MCPH): клинические проявления, генетическая гетерогенность и континуум мутаций.Orphanet J Rare Dis 6:39 (2011).
45. Малинджер Дж., Лев Д., Орен М., Лерман-Саги Т.: Невизуализация полой септи пеллюцидии не является синонимом агенеза мозолистого тела. Ультразвуковой акушерский гинекол 40: 165-170 (2012).
46. Marthiens V, Rujano MA, Pennetier C, Tessier S, Paul-Gilloteaux P, Basto R: Амплификация центросом вызывает микроцефалию.Nat Cell Biol 15: 731-740 (2013).
47. Martin CA, Ahmad I, Klingseisen A, Hussain MS, Bicknell LS, et al: Мутации в PLK4 , кодирующие главный регулятор биогенеза центриолей, вызывают микроцефалию, задержку роста и ретинопатию. Нат Генет 46: 1283-1292 (2014).
48. Mirzaa GM, Vitre B, Carpenter G, Abramowicz I, Gleeson JG, et al: Мутации в CENPE определяют новый кинетохор-центромерный механизм для микроцефального первичного карликовости.Хум Генет 133: 1023-1039 (2014).
49. Morris-Rosendahl DJ, Kaindl AM: Какие технологии секвенирования следующего поколения (NGS) позволили нам узнать о первичной аутосомно-рецессивной микроцефалии (MCPH). Mol Cell Probes 29: 271-281 (2015).
50. Моден С., де Тайрак М., Дубург С., Роуз С., Карре В. и др.: Гомозиготная мутация STIL вызывает голопрозэнцефалию и микроцефалию у двух братьев и сестер.PLoS One 10: e0117418 (2015).
51. Мойер TC, Clutario KM, Lambrus BG, Daggubati V, Holland AJ: Связывание STIL с Plk4 активирует киназную активность, способствуя сборке центриолей. J Cell Biol 209: 863-878 (2015).
52. Need AC, Shashi V, Hitomi Y, Schoch K, Shianna KV, et al: Клиническое применение секвенирования экзома в недиагностированных генетических состояниях.J Med Genet 49: 353-361 (2012).
53. Ohta M, Ashikawa T., Nozaki Y, Kozuka-Hata H, Goto H и др.: Прямое взаимодействие Plk4 с STIL обеспечивает образование одного процентриоля на родительскую центриоль. Нац Коммуна 5: 5267 (2014).
54. Папари Э., Бастами М., Фархади А., Абдини С.С., Хоссейни М. и др.: Исследование первичной микроцефалии в провинции Бушер в Иране: новые мутации STIL и ASPM.Clin Genet 83: 488-490 (2013).
55. Paridaen JT, Huttner WB: Нейрогенез во время развития центральной нервной системы позвоночных. EMBO Rep 15: 351-364 (2014).
56. Peel N, Stevens NR, Basto R, Raff JW: Сверхэкспрессия белков репликации центриолей in vivo вызывает избыточную дублирование центриолей и образование de novo.Curr Biol 17: 834-843 (2007).
57. Pfaff KL, Straub CT, Chiang K, Bear DM, Zhou Y, Zon LI: мутант рыб-зебры кассиопея показывает, что SIL необходим для организации митотического веретена. Mol Cell Biol 27: 5887-5897 (2007).
58. Poirier K, Lebrun N, Broix L, Tian G, Saillour Y и др.: Мутации в TUBG1 , DYNC1h2 , KIF5C и KIF2A вызывают пороки развития коры головного мозга и микроцефалию.Нат Генет 45: 639-647 (2013).
59. Раббани Б., Махди Н., Хосомичи К., Накаока Х., Иноуэ I. Секвенирование следующего поколения: влияние секвенирования экзома на характеристику менделевских расстройств. Дж. Хум Генет 57: 621-632 (2012).
60. Раббани Б., Текин М., Махди Н.: Перспективы секвенирования всего экзома в медицинской генетике.Дж. Хум Генет 59: 5-15 (2014).
61. Ричардс С., Азиз Н., Бейл С., Бик Д., Дас С. и др.: Стандарты и руководящие принципы для интерпретации вариантов последовательностей: совместная консенсусная рекомендация Американского колледжа медицинской генетики и геномики и Ассоциации молекулярной патологии.Genet Med 17: 405-424 (2015).
62. Родригес-Мартинс А., Рипарбелли М., Каллайни Г., Гловер Д.М., Бетанкур-Диас М.: Возвращаясь к роли материнской центриоли в биогенезе центриолей. Science 316: 1046-1050 (2007).
63. Rogers GC, Rusan NM, Roberts DM, Peifer M, Rogers SL: Убиквитинлигаза SCF Slimb регулирует уровни Plk4 / Sak, чтобы блокировать редупликацию центриолей.J. Cell Biol. 184: 225-239 (2009).
64. Schmidt TI, Kleylein-Sohn J, Westendorf J, Le Clech M, Lavoie SB и др.: Контроль длины центриоли с помощью CPAP и CP110. Curr Biol 19: 1005-1011 (2009).
65. Shaheen R, Al Tala S, Almoisheer A, Alkuraya FS: Мутация в PLK4 , кодирующая главный регулятор образования центриоли, определяет новый локус для первичной карликовости.J Med Genet 51: 814-816 (2014).
66. Sharma A, Aher A, Dynes NJ, Frey D, Katrukha EA, et al: Centriolar CPAP / SAS-4 обеспечивает медленный процессивный рост микротрубочек. Dev Cell 37: 362-376 (2016).
67. Singla V, Romaguera-Ros M, Garcia-Verdugo JM, Reiter JF: Ofd1 , ген болезни человека, регулирует длину и дистальную структуру центриолей.Dev Cell 18: 410-424 (2010).
68. Скуфиас Д.А., ДеБонис С., Сауди Й., Лебо Л., Кревель I и др.: S-тритил-L-цистеин является обратимым ингибитором сильного связывания кинезина Eg5 человека, который специфически блокирует митотическую прогрессию. J. Biol Chem. 281: 17559-17569 (2006).
69. Соден С.Е., Сондерс К.Дж., Уиллиг Л.К., Фэрроу Е.Г., Смит Л.Д. и др.: Эффективность секвенирования экзома и генома, определяемая тяжестью заболевания, для диагностики нарушений развития нервной системы.Sci Transl Med 6: 265ra168 (2014).
70. Стивенс Н.Р., Доббелаер Дж., Бранк К., Франц А., Рафф JW: Drosophila Ana2 — это консервативный фактор дупликации центриолей. J. Cell Biol. 188: 313-323 (2010).
71. Strnad P, Leidel S, Vinogradova T, Euteneuer U, Khodjakov A, Gönczy P: Регулируемые уровни HsSAS-6 обеспечивают образование единственного процентиля центриоля во время цикла дупликации центросомы.Dev Cell 13: 203-213 (2007).
72. Tang C, Fu R, Wu K, Hsu W, Tang T: CPAP — это белок, регулируемый клеточным циклом, который контролирует длину центриоли. Nat Cell Biol 11: 825-831 (2009).
73. Tang C, Lin S, Hsu W, Lin Y, Wu C и др.: Белок микроцефалии человека STIL взаимодействует с CPAP и необходим для образования процентриолей.EMBO J 30: 4790-4804 (2011).
74. Thauvin-Robinet C, Cossée M, Cormier-Daire V, Van Maldergem L, Toutain A и др.: Исследования клинической, молекулярной и генотип-фенотипической корреляции из 25 случаев орально-лицевого-цифрового синдрома 1 типа: француз и бельгиец. совместное исследование. J Med Genet 43: 54-61 (2005).
75. Цуцуми М., Йокои С., Мия Ф., Мията М., Като М. и др.: Новые сложные гетерозиготные варианты в PLK4, выявленные у пациента с аутосомно-рецессивной микроцефалией и хориоретинопатией. Eur J Hum Genet 24: 1702-1706 (2016).
76. Узбеков Р., Маурел Д., Авелин П., Паллу С., Бенхаму С., Рошфор Г.: Микроскопия микроанализа тонкой ультраструктуры центросомы механочувствительной первичной реснички остеоцитов.Microsc Microanal 18: 1430-1441 (2012).
77. Verloes A, Drunat S, Gressens P, Passemard S: Первичные аутосомно-рецессивные микроцефалии и расстройства спектра синдрома Секеля, в Pagon RA, Adam MP, Ardinger HH, Wallace SE, Amemiya A, et al (eds): GeneReviews® [Интернет] ( Вашингтонский университет, Сиэтл, 1993-2017).Первоначальная публикация: 1 сентября 2009 г .; последнее обновление: 31 окт 2013.
78. Vulprecht J, David A, Tibelius A, Castiel A, Konotop G, et al: STIL необходим для дупликации центриолей в клетках человека. J Cell Sci 125: 1353-1362 (2012).
79. Wang G, Jiang Q, Zhang C: Роль митотических киназ в соединении цикла центросомы со сборкой митотического веретена.J Cell Sci 127: 4111-4122 (2014).
80. Ян Й., Музны Д.М., Рид Дж. Г., Бейнбридж М. Н., Уиллис А. и др.: Клиническое секвенирование всего экзома для диагностики менделевских расстройств. N Engl J Med 369: 1502-1511 (2013).
81. Ян Й., Музны Д.М., Ся Ф., Ниу З., Персона Р. и др.: Молекулярные данные среди пациентов, направленных на клиническое секвенирование всего экзома.JAMA 312: 1870-1879 (2014).
82. Zillhardt JL, Poirier K, Broix L, Lebrun N, Elmorjani A, et al: Мозаичные мутации родительской зародышевой линии, вызывающие повторяющиеся формы пороков развития коры головного мозга. Eur J Hum Genet 24: 611-614 (2016).

Автор Контакты

Hilde Van Esch, MD, PhD

Центр генетики человека, KU Leuven

Herestraat 49

BE-3000 Leuven (Бельгия)

E-Mail [email protected]

Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Одобрена: 2 июня 2017 г.
Опубликована онлайн: 27 сентября 2017 г.
Дата выпуска: ноябрь 2017 г.

Количество страниц для печати: 12
Количество рисунков: 4
Количество столов: 1

ISSN: 1661-8769 (печатный)
eISSN: 1661-8777 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/MSY

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме или любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование, или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарства: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарства, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Однако ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новый и / или редко применяемый препарат.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, нанесенный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

STIL откроется на Латах в Бойсе, где будет продаваться лучшее мороженое Айдахо

За четыре коротких года ресторан STIL превратился в мороженое в Бойсе, которое просто необходимо.

Ориентируясь на качество, креативность и необычный вкус, местное предприятие расширилось от центра Бойсе до ранчо Харриса и даже продуктовых магазинов.

А теперь скамья Бойсе.

STIL планирует открыть новый магазин в четверг, 8 июля, в 13 S.Latah St. Это первый арендатор, открывающийся в комплексе из трех зданий, который заменяет снесенную автомойку. Следующим арендатором станет кофейня Push & Pour. Застройщик нацелен на ресторан или паб в качестве третьего арендатора.

Тайминг STIL не может быть лучше. Компания Food & Wine только что выбрала STIL в качестве сенсации №1 в Айдахо в новой статье «Лучшее мороженое в каждом штате». Вот точка зрения Food & Wine:

«Некоторые люди просто открывают магазин мороженого. В 2017 году, когда Кейси Аллен и Дэн Селл открыли The STIL (полное название: The Sweetest Things In Life) в Бойсе, они фактически открыли три из них под одной крышей.Для приверженцев традиции есть сливочное мороженое, приготовленное из молока штата Айдахо; для тех, кто хочет жить дальше молочных продуктов, есть множество веганских блюд; для тех из нас, кто склонен жить так, будто завтра не наступит, магазин известен своим очень взрослым (читай: выпившим) мороженым, таким как Скотч, Скотч, Скотч — скотч-эль, ириски и печенье с ириской. Сейчас два магазина продают все три вещи. По нашей странной математике это означает, что магазинов шесть ».

Хорошо, значит, по уникальному методу подсчета Food & Wine скоро будет девять магазинов? Мороженое с добавлением спирта должно быть им всколыхнулось.

В любом случае, новейшая локация STIL может быть самой крутой локацией STIL.Специально для жителей этого микрорайона. Аллен надеется произвести большой фурор, когда он откроется.

«Наш план состоит в том, чтобы выстроить в очередь несколько грузовиков с едой до конца этой недели и выходных, — сказал он по электронной почте, — вместе с живой музыкой и множеством игр на лужайке / дворе в большом внутреннем дворике. Помещение прекрасно сочетается с газовыми ямами для костра, большими столами для пикника, и все время после обеда и вечера оно находится в тени ».

Если вы не знали, STIL также продает пиво.И полеты пива в паре с мороженым.

А эти «пьяные» ароматы? На самом деле они вас не забьют. Вообще. Использование ликера в качестве ингредиента мороженого похоже на приготовление ромовых шариков — хотя вам должно быть 21 год, чтобы их съесть.

В любом случае, у STIL никогда не возникало проблем с созданием ажиотажа.

Истории, похожие на Idaho Statesman

Автор развлекательных программ и обозреватель, Майкл Дидс ведет хронику хорошей жизни в Бойсе: рестораны, концерты, культура и другие интересные вещи.Дело материализовалось в Idaho Statesman в качестве стажера в 1991 году, прежде чем он взял на себя роли спортивного обозревателя, редактора художественных фильмов и музыкального критика. На протяжении многих лет его внештатная работа варьировалась от написания обзоров альбомов для The Washington Post до раскручивания рекламы о Бойсе в том авиационном журнале, который вы оставили в самолете. Дидс имеет степень бакалавра редакционной журналистики Университета Небраски.

PLK4 способствует дупликации центриолей путем фосфорилирования STIL, чтобы связать колесо тележки процентриоли со стенкой микротрубочек

Существенных изменений:

1) Относительный уровень экспрессии всех протестированных здесь белков следует сравнивать с эндогенными уровнями экспрессии.Эта информация была предоставлена ​​в одних экспериментах, но не в других.

Мы благодарим рецензентов за указание на это упущение. Экспрессия трансгенов Myc-GFP-STIL показана на фиг. 3 — рисунок в приложении 1A, B и примерно в 2-3 раза выше, чем у эндогенного STIL. Кроме того, на рисунке 5B мы показываем, что экспрессия трансгена Myc-GFP-CPAP примерно в 2-3 раза выше, чем экспрессия эндогенного CPAP. Хотя трансгены Myc-GFP-STIL и Myc-GFP-CPAP сверхэкспрессируются, экспрессия любого трансгена эффективно устраняет отказ от дупликации центриолей после истощения соответствующего эндогенного белка и приводит к минимальной избыточной дупликации центриолей (рис. 3A и 5C).

2) Причины использования мутации PLK4 ^∆24 и использования формы PLK4, не содержащей поло боксов (потенциально изменяющей субстратную специфичность) для анализов киназ in vitro, необходимо указать более четко. Также было бы полезно представить результаты в дополнительном файле 1 в более полном контексте, сообщив, сколько из идентифицированных сайтов фосфорилирования соответствует консенсусу PLK4, и сколько серинов и треонинов не фосфорилировались (и сколько из них консервативно и / или соответствуют консенсусу).

PLK4 существует как облигатный гомодимер, который фосфорилирует себя в транс, чтобы запустить собственную деградацию протеасомой. Следовательно, активная киназа PLK4 чрезвычайно нестабильна и ее трудно экспрессировать в клетках. Поэтому мы использовали мутант PLK4 ^∆24 , у которого отсутствуют сайты фосфорилирования, необходимые для самоуничтожения. Мутант PLK4 ^∆24 также накапливается до одного и того же уровня независимо от активности киназы, что позволяет избежать осложнений, связанных с разными уровнями экспрессии киназной активной и неактивной PLK4.Мы добавили к тексту следующее предложение, чтобы прояснить этот момент: «Активный PLK4 запускает собственную деградацию, и поэтому мы использовали мутант PLK4 ^∆24 , который стабилизирует киназу, предотвращая саморазрушение, индуцированное PLK4».

Как правильно указали составители обзора, анализы киназ in vitro и эксперименты с понижением частоты проводились с киназным доменом His-PLK4, а не с полноразмерным рекомбинантным PLK4. Причина этого техническая. Во-первых, полноразмерный PLK4 трудно экспрессировать и очищать рекомбинантно.Хотя нам это удавалось в прошлом, полноразмерный белок GST-PLK4 имеет низкий выход и менее активен, чем только киназный домен. Во-вторых, нам удалось экспрессировать PLK4 только с помощью тега большой растворимости GST, и в экспериментах in vitro с опусканием вниз GST использовали для опускания STIL. Поэтому в этом анализе было более удобно использовать другую аффинную метку для PLK4, и у нас уже был под рукой рекомбинантный киназный домен His-PLK4. Наконец, киназы in vitro считаются относительно неразборчивыми, и поэтому к этим тестам следует относиться с осторожностью.Наша интерпретация состоит только в том, что PLK4 может фосфорилировать остатки, которые мы идентифицируем на STIL, но мы осторожны, чтобы не предполагать, что PLK4 фосфорилирует все эти сайты in vivo. Мы добавили следующее предложение в раздел «Результаты», чтобы прояснить, что в нашем анализе киназы in vitro использовался киназный домен PLK4, а не полноразмерный белок: «Рекомбинантный полноразмерный GST-STIL был фосфорилирован с помощью киназного домена His-PLK4. in vitro ». Мы также более четко подчеркиваем, что идентифицированные нами сайты считаются сайтами фосфорилирования in vitro.«Из 84 сайтов фосфорилирования in vitro, которые мы идентифицировали на STIL, S428 представлял особый интерес, поскольку он высококонсервативен, соответствует согласованной последовательности фосфорилирования PLK4 и расположен близко к известной области связывания CPAP на STIL…»

Наконец, мы добавили информацию в дополнительный файл 1, чтобы уточнить, сколько остатков серина и треонина не фосфорилировалось киназным доменом His-PLK4 и сколько из этих сайтов соответствовало консенсусу PLK4.

3) Статистический анализ данных был непоследовательным и часто отсутствовал.Это привело к некоторой путанице в отношении того, что вы называете «значительным». В частности, ваше заявление о том, что «фосфорилирование STIL S428 в клетках человека не играет значительной роли в привлечении центриолей STIL», кажется слишком сильным в свете данных, показанных на рисунке 3C (хотя из-за отсутствия статистики трудно быть Конечно). Статистические данные должны применяться ко всем соответствующим данным (а используемые методы полностью объяснены в легенде к каждому рисунку).

Приносим извинения за недоразумение.Теперь мы добавили статистический анализ для всех основных сравнений, которые мы проводим в исследовании. Используемые статистические методы описаны в подписях к рисункам и в исходном файле рукописи с пометкой «Сводка статистики».

4) Вы указываете в конце статьи, что STIL присутствует только на процентриоле, тогда как CPAP присутствует как на материнской центриоле, так и на процентриоле. Это потенциально важно для интерпретации некоторых экспериментов по локализации и FRAP и должно быть указано намного раньше в рукописи.Это может привести к некоторой путанице. Например, вы заключаете, что рекрутирование большинства CPAP, присутствующих в центросоме, не требует STIL. На первый взгляд может показаться, что это опровергает расхожее мнение о том, что STIL привлекает CPAP к собирающейся дочерней центриоле, хотя на самом деле ваши данные в значительной степени согласуются с этой возможностью (см., Например, рисунок 3F, где кажется, что CPAP обычно локализуется в более старой центриоле, но не рекрутируется в новую центриоль при наличии мутации S428A).Таким образом, ваша количественная оценка общей флуоресценции центросом, а не индивидуальной флуоресценции центриолей, может ввести в заблуждение читателей, не уделяющих должного внимания. Похоже, вы полагаете, что STIL задействует CPAP в процентриоле, но не требуется для поддержания CPAP в материнских центриолях, которые уже сформировались (предположительно до истощения STIL) — но ваше мнение об этом становится ясным только в Обсуждении. Эти моменты необходимо представить более четко. Мы думаем, что было бы полезно, если бы вы могли предоставить простые схемы, иллюстрирующие вашу интерпретацию того, что происходит в исследованиях локализации и FRAP, где это является проблемой.Это может потребовать некоторого размышления.

Мы согласны с тем, что наше представление этих данных не было оптимальным. Теперь мы изменили текст, чтобы более четко представить нашу интерпретацию этих данных, в то же время стараясь не переоценить наши выводы. Мы также изменили порядок представления результатов и добавили более подробное обсуждение этих экспериментов сразу после представления данных. Таким образом, наши данные показывают, что взаимодействие CPAP-STIL необходимо для стабильного включения обоих белков в центросому, но специфическое нарушение этого взаимодействия не оказывает большого влияния на степень, в которой любой белок накапливается в центросоме.Тем не менее, истощение STIL действительно значительно увеличивает оборот CPAP и снижает локализацию CPAP в центросоме. Это говорит о том, что STIL рекрутирует дополнительные белки, которые коллективно действуют, чтобы стабилизировать включение CPAP в центросому.

Чтобы прояснить нашу интерпретацию, мы добавили следующее обсуждение данных по обороту CPAP: «В то время как STIL уникально локализован в процентриоле, CPAP присутствует как в родительской центриоле, так и в процентриоле. […] Тем не менее, учитывая, что STIL локализуется исключительно в процентриоле, одна интерпретация наших данных состоит в том, что STIL требуется для стабильного включения CPAP в процентриоль, в то время как родительская центриоль и пул PCM CPAP являются динамическими и демонстрируют временную связь с центросома.”

Мы также заявляем: «Эти данные предполагают, что связывание STIL позволяет более стабильно включать CPAP в центросому, возможно, облегчая взаимодействия с CPAP в процентриоле. Однако, поскольку истощение STIL привело к более высокому уровню оборота CPAP, чем специфическое нарушение взаимодействия STIL / CPAP, вполне вероятно, что STIL рекрутирует дополнительные белки, которые в совокупности действуют для стабилизации включения CPAP в центросому ».

Позже в разделе «Результаты» мы утверждаем: «Это предлагает модель, в которой CPAP локализуется в родительской центриоле независимо от STIL, в то время как локализованный в процентриоле CPAP требует STIL для стабильного связывания.[…] Мы пришли к выводу, что рекрутирование большинства CPAP, присутствующих в центросоме, не требует связывания CPAP с STIL ».

Хотя взаимодействие CPAP-STIL не требуется для основной части рекрутирования CPAP в центросомы, наш анализ центриолей, образованных de novo, показывает, что связывание STIL с CPAP необходимо для рекрутирования CPAP в сайт образования центриолей de novo. Мы представляем два возможных объяснения этого несоответствия в Discussion: «Хотя рекрутирование CPAP для сборки de novo центриолей требует фосфорилирования STIL S428, эта модификация не требуется для рекрутирования основной части CPAP в центросомы.[…] В любом случае ясно, что даже если взаимодействие STIL-CPAP не является строго необходимым для рекрутирования любого из белков в канонически дублирующиеся центриоли, оно позволяет более стабильную интеграцию этих белков в центросому ».

5) Эксперимент по вымыванию центринона является хорошей попыткой удовлетворить потребность в фосфорилировании STIL в упрощенной системе, в которой новые центриоли образуются без материнской центриоли. Однако мы думаем, что в отсутствие свидетельств ЭМ вам следует быть более осторожными в отношении природы различных наблюдаемых очагов.

Мы согласны с тем, что это важное соображение. Мы рассмотрели возможность проведения ЭМ, чтобы подтвердить, что различные наблюдаемые нами очаги STIL были центриолями (для WT STIL) или центриольными колесами тележки (для STIL S428A). Однако после консультации со специалистом в области ЭМ мы пришли к выводу, что мы не сможем обнаружить отдельно стоящие структуры колеса тележки, образованные мутантом STIL S428A, с помощью ЭМ. Идентификация колес тележки центриолей с помощью ЭМ чрезвычайно сложна и требует наличия существующей центриоли для направления области поиска.Поскольку у нас нет ЭМ для подтверждения наших утверждений о том, что наблюдаемые нами очаги STIL являются костными центриолями или свободно стоящими колесами тележки, мы изменили текст, чтобы указать рекрутирование белков в «фокусы STIL», а не в сайты «de novo». центриольная сборка ».

[Примечание редакции: до принятия были запрошены дополнительные исправления, как описано ниже.]

1) Теперь вы показываете уровни экспрессии относительно эндогенных белков для всех ваших трансгенно экспрессируемых белков, но мы считаем важным указать в основном тексте, что, по вашей оценке, они превышены примерно в 2-3 раза, и ваши аргументы относительно того, почему это не проблема.

Благодарим вас за предложение. Мы добавили эту информацию в текст.

2) Вы должны указать, почему белок DmPLK4 ^SBM стабилизирован и что означает SBM.

Благодарим вас за предложение. Мы добавили эту информацию в соответствующую легенду рисунка.

Stil Vor Talent 300 | Часть 1 от Stil Vor Talent на Beatport

Заняв первое место в дебютном томе триад, постоянный посетитель лейбла Сэм Шур подает на вступление клубную эпопею высокого давления со вкусом Ближнего Востока.Источая сильную смесь ладана, мирры и толстокостного EBM-пунша, трек звучит как гипнотический фрактал, созданный, чтобы поймать всех в липкой паутине тяжелых басовых уловок. После дебютного альбома Symbiosis, выпущенного ранее в этом году на канале SVT, группа Brigado Crew из Буэнос-Айреса объединила свои усилия с Уббой на монструозном чаггере, направляющемся в открытый космос.

SKALA следует за глубоко атмосферным голосом Eqi, треком, объединяющим задумчивую спектральность, навязчивые синтезаторные зацепки и поистине накачивающую динамику.Давние друзья и сотрудники Hidden Empire вносят часть своих инструментально богатых и тонких построений с вздымающимся волосами Baba Ghanoush, в то время как Arnas D & Lake Avalon балуют нас лихорадочными американскими горками мелодии с ушным червем Cordial, все на мускулистых басах арпеджио, поп-вокал и мелодичные контрапункты, пропитанные ностальгией.

Сдвигая рамки в сторону более синкопированного материала, Aurkas Pyrolisis отправляет нас в высшие сферы сознания с тонкой смесью острых искажений, как в семействе Джеймса Холдена и Border Community, и с дальнейшим просторным, нетрадиционным минимализмом.Прямой клубный роман, Анри Бергманнс Меркура не стремится ни к чему, кроме как вызвать полный коммуникативный экстаз среди рейверов и мечтателей, в то время как первые эпизоды ближе к Deion, любезно предоставленные Boy Next Door, ускоряют скорость еще на ступеньку выше. — поразительное развертывание синтезаторных линий размером со стадион и непрерывное беспокойное, но эрогенное крещендо.

STIL — Библиотека инфраструктуры таблиц Starlink

Универсальная обработка таблиц Java для астрономии

Что такое СТИЛ?

STIL — чистая библиотека Java для общий ввод, вывод и обработка табличных данных. Он представляет прикладному программисту представление таблицы, которая выглядит одинаково независимо от того, был ли он взят из файла FITS, VOTable, текстовый файл ASCII, запрос к реляционной базе данных, или что-то еще. Таким образом, приложению не нужно беспокоиться о формате хранения. таблиц как при чтении, так и при их записи, он может концентрировать при выполнении обработки.Идея STIL о таблице достаточно богата, чтобы включать таблицу и столбец. метаданные и ячейки таблицы, которые содержат скалярные, одномерные или многомерные массив данных числового, строкового или других типов. Это хорошо подходит для астрономических данных, хотя может быть полезно и в других областях.

STIL имеет ряд поддерживаемых форматов ввода и вывода. (включая голосов , FITS , Feather , ECSV , SQL , ASCII , CSV , CDF , MRT , Паркет , ГБИН ) и может быть расширен, чтобы справиться с другими.

Возможности

Общие функции

Общая таблица ввода-вывода имеет следующие особенности:

• Поддерживается множество форматов сериализации таблиц
• Подключаемая архитектура позволяет добавлять новые форматы
• Преобразование любого формата в любой тривиально
• Возможен доступ к большим таблицам (не ограничено памятью, потоковая передача поддерживается там, где это возможно)
• Фреймворк для параллельной обработки больших таблиц
• Многотабличное чтение и запись для соответствующих форматов
• Полная документация по javadocs и руководство программиста / обзорная документация
• Компоненты графического интерфейса, включая поддержку перетаскивания таблицы

Голосование Особенности

STIL включает в себя современные возможности для Голосовой ввод / вывод который при желании можно использовать в значительной степени независимо остальной части пакета.Помимо общих функций, перечисленных выше, он имеет следующие особенности:

• Читает и записывает все форматы сериализации VOTable (ТАБЛИЧНЫЕ ДАННЫЕ, ПОДХОДИТ, ДВОИЧНЫЙ, ДВОИЧНЫЙ2)
• Полный доступ DOM к иерархической структуре документа, без интенсивного использования памяти
• Гибридный синтаксический анализ SAX / DOM для эффективного ввода
• Гибкий вывод таблиц (можно создавать иерархические документы)
• При синтаксическом анализе не предпринимаются попытки сетевых подключений для получения VOTable DTD / схемы
• Разбор несоответствующих / недействительных документов с максимальной эффективностью
• Полная совместимость с VOTable 1.0, 1.1, 1.2, 1.3 и 1.4 стандарты
• Перекрестная ссылка полного идентификатора / ссылки

Поддерживаемые форматы

Форматы, включая следующие, в настоящее время поддерживаются для ввода таблиц:

• ПОДХОДИТ
• ГОЛОСОВАНИЕ
• CDF
• ECSV
• MRT
• Паркет
• Перо
• SQL
• ASCII
• Значение, разделенное запятыми
• IPAC
• ГБИН

• ПОДХОДИТ
• ГОЛОСОВАНИЕ
• ECSV
• Паркет
• Перо
• SQL
• ASCII
• IPAC
• Значение, разделенное запятыми
• Текст, понятный человеку
• HTML
• LaTeX

Документация

Существует два основных источника документации по STIL:

• Основной обзорный документ программиста — SUN / 252 , доступный как:
• Также доступна исчерпывающая документация по API:

Вы можете скачать полный комплект документации (SUN / 252 в различных формах). плюс javadocs) в zip-архиве документации.

Загрузок

Текущая версия STIL — 4.0-4, выпущена 15 октября 2021 года.

STIL выпускается под LGPL (другие лицензии могут быть доступны по запросу), а исходный код доступен по адресу https://github.com/Starlink/starjava. Основные компоненты доступны здесь:

Для поклонников maven доступен STIL, начиная с STIL v4.0-2 / июня 2021 г., в Центральный репозиторий Maven под идентификатором группы uk.ac.starlink .

Предыдущие версии можно найти на http://andromeda.star.bristol.ac.uk/releases/stil/. Вы можете увидеть историю версий в пользовательском документе.

Текущая версия STIL была разработана с использованием Java SE 8, но ожидается, что он будет работать с любой версией J2SE Java 8 или более поздней. Версии STIL до v3.3-3 работают с Java 6 или новее.

Дополнительная информация

Если вам нравится STIL, вы полюбите

СТИЛТЫ

набор инструментов STIL, набор инструментов командной строки для работы с таблицами.

TOPCAT

графический инструмент для просмотра, построения, анализа и редактирования таблиц. который извлекает выгоду из всех функций STIL.

Существуют следующие списки рассылки для тем, связанных с STIL и друзьями:

Если у Вас есть комментарии, вопросы, пожелания, ошибки и т. Д., Просьба либо используйте Topcat-пользователь список рассылки или свяжитесь со мной напрямую:

Jooske Stil MFT

Отношения сложные. Иногда кажется, что чем больше вы заботитесь, тем сложнее становятся отношения.Причина этого в том, что нами движут две противостоящие друг другу силы. Неудивительно, что мы сбиты с толку и сбиты с толку. Мы одинаково и противоположно движимы эгоизмом и самоотверженностью. Любовь создает конфликт, а также побуждает проложить путь через это минное поле. Понимание того, что нас сводит с ума (сумасшествие), дает представление и направление, как…

Подробнее Подробнее

БЫТЬ НАСТОЯЩИМ Чаще всего мы сосредоточены на будущем или прошлом, но только в настоящем вы можете оказать какое-либо влияние.Сейчас здесь трудно находиться, потому что это противоречит природе. Мы созданы, чтобы размышлять о прошлых ошибках и бесконечно планировать будущее. Это важно, но для того, чтобы жить счастливо, нужно работать в присутствии. Ведь можно не наслаждаться…

Подробнее Подробнее

Полезно рассмотреть первоначальную эволюционную цель состояния, чтобы понять его и лечить. Есть 4 класса психических расстройств. Первая — это группа, которая отличается чрезмерной энергией.Это может включать беспокойство, панические атаки, обсессивно-компульсивное расстройство, бессонницу и фобии. Эти условия демонстрируют сеть страха. Неспособность расслабиться, учащенное сердцебиение, навязчивое мышление, ритуализированное поведение и суеверное мышление.